燒傷后單核細(xì)胞表面分子CD86變化與炎癥反應(yīng)的關(guān)系.pdf

1、研究背景：失控性全身炎癥反應(yīng)是嚴(yán)重?zé)齻笃鞴俟δ軗p傷的主要原因之一,如何有效地調(diào)控全身炎癥反應(yīng),減少器官的功能不全,是燒傷治療中的重要課題。 燒傷可促使機(jī)體發(fā)生全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS),它具有明確的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn),其診斷依據(jù)是心率、呼吸、體溫和白細(xì)胞數(shù)量的變化等；同時(shí)機(jī)體也啟動(dòng)內(nèi)源性抗炎機(jī)制,即代償性抗炎癥反應(yīng)綜合征(CARS),以抑制細(xì)胞免疫功能,它的診斷主要是根據(jù)免疫學(xué)指標(biāo),其特點(diǎn)是免疫功能降低；倘若全身炎癥反應(yīng)綜合征和

2、代償性抗炎反應(yīng)綜合征同時(shí)存在,這種狀況被稱為混合型抗炎反應(yīng)綜合征(MARS)。燒傷后免疫功能紊亂則是造成全身性組織損傷和機(jī)體對(duì)于致病微生物易感性增高的主要原因。 單核細(xì)胞是機(jī)體的重要免疫細(xì)胞,它可以根據(jù)細(xì)胞內(nèi)外多種信號(hào)相應(yīng)的調(diào)整自身功能,以適應(yīng)周圍微環(huán)境的變化；單核細(xì)胞受內(nèi)毒素和IFN-R刺激后分化為M1型,它不僅能殺死入侵的微生物,而且可以募集并活化免疫效應(yīng)細(xì)胞；單核細(xì)胞受IL-4,IL-13等刺激后分化為M2型,它的功能傾向

3、于組織修復(fù)、血管再生,以降低炎癥反應(yīng)?？梢妴魏思?xì)胞的變化可以反應(yīng)機(jī)體免疫功能的改變。 現(xiàn)在認(rèn)為,協(xié)同刺激信號(hào)在T細(xì)胞活化中起重要作用,因?yàn)閰f(xié)同刺激信號(hào)的缺失將導(dǎo)致T細(xì)胞失能(anergy)。CD86是抗原遞呈細(xì)胞表面出現(xiàn)最早的、功能上非常重要的CD28/CTLA-4的配體。因此,對(duì)單核細(xì)胞表面分子標(biāo)記的CD86的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行監(jiān)測,同時(shí)結(jié)合其他的免疫指標(biāo),可以對(duì)燒傷后機(jī)體免疫狀況的進(jìn)行初步判斷,對(duì)于疾病的發(fā)展和變化也有所預(yù)見。

4、 燒傷后機(jī)體產(chǎn)生的促炎因子(INF-R,IL-2,IL-1,IL-6,IL-12,IL-8等)和抑炎因子(IL-10,IL-4,IL-13,IL-1ra)眾多,難以根據(jù)某種因子的變化,準(zhǔn)確的判斷患者處于哪種炎癥狀態(tài),目前有學(xué)者認(rèn)為輔助T淋巴細(xì)胞亞群(TH),特別是TH1和TH2細(xì)胞功能的改變能夠反映機(jī)體的免疫功能,TH1/TH2的平衡變化有助于反映SIRS/CARS的平衡,并且把測定IFN-R作為TH1的功能指標(biāo),測定IL-4作為T

5、H2的功能指標(biāo),但是由于IFN-R和IL-4來源的多樣性及生物作用的復(fù)雜性,其測定的生物學(xué)意義受到一定的懷疑。 根據(jù)臨床診斷SIRS的標(biāo)準(zhǔn),嚴(yán)重?zé)齻?0天內(nèi),患者平均有28天處于SIRS狀態(tài),但是無法判斷患者的免疫狀態(tài)是過度激活還是被抑制的。單核細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞,但目前根據(jù)單核細(xì)胞的功能變化區(qū)分SIRS或CARS,從而判斷燒傷后患者免疫狀態(tài)的研究還不多。 研究目的： 1、研究燒傷后單核細(xì)胞表面分子標(biāo)記CD8

6、6的變化。 2、研究燒傷后血漿中細(xì)胞因子的變化。 3、研究單核細(xì)胞功分子標(biāo)記CD86與細(xì)胞因子及炎癥反應(yīng)之間的關(guān)系。 研究方法： 第一部分觀察大面積燒傷患者單核細(xì)胞表面分子CD86在燒傷后不同時(shí)間點(diǎn)的變化 本項(xiàng)研究選取了28例研究對(duì)象,其中燒傷患者14例,燒傷患者選擇：燒傷面積大于30％TBSA,年齡在18-65歲之間,沒有基礎(chǔ)疾病；正常陰性對(duì)照為14例。燒傷患者分別在燒傷后1、3、5、7、10、

7、14天抽血,如發(fā)生膿毒血癥,增加測定次數(shù)。單核細(xì)胞經(jīng)分離后加入熒光抗體,經(jīng)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表面分子標(biāo)記(CD-14,CD-86,HLA-DR)的變化。將所有入組的燒傷患者按燒傷指數(shù)50為界分成輕重兩組,并每組內(nèi)按燒傷后時(shí)間1-3天、5-7天、10-14天、及大于20天的四個(gè)時(shí)間段縱向分成四個(gè)階段,各組既可以與正常對(duì)照進(jìn)行橫向比較,又可以按著不同的時(shí)間段內(nèi)部進(jìn)行縱向比較。 第二部分觀察大面積燒傷患者血漿內(nèi)細(xì)胞因子CRP、IL-1

8、β、IL-6、IL-8、IL-10在傷后不同時(shí)點(diǎn)的變化 血標(biāo)本用ELISA方法測定細(xì)胞因子。燒傷患者分別在燒傷后1、3、5、7、10、14天,與測定單核細(xì)胞表面分子標(biāo)記CD86一起抽血,如發(fā)生膿毒血癥,增加測定次數(shù)。無菌采集患者及健康志愿者外周血10ml,采用ELISA法測定IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及CRP濃度。觀察細(xì)胞因子在燒傷后隨時(shí)間變化的趨勢。 IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及CRP試

9、劑盒購于深圳晶美生物工程有限公司。所有操作步驟均按說明書進(jìn)行。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法以SPSS10.5.1軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以-x±s表示,兩組均數(shù)比較用非參數(shù)u檢驗(yàn),相關(guān)分析用Spearman秩相關(guān)分析。 研究結(jié)果： 第一部分:在傷后1-3天,燒傷面積>30％TBSA患者的單核細(xì)胞CD86及CD86MFI迅速降低,然后逐漸恢復(fù),且CD86與CD86MFI的恢復(fù)并不同步。燒傷指數(shù)>50的重度燒傷組CD86和CD86

10、MFI在1-3天降低,在5-7天達(dá)到最低點(diǎn),與正常對(duì)照有明顯差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而燒傷指數(shù)<50輕度燒傷組CD86與正常對(duì)照無顯著性差別。吸入性損傷使得燒傷后單核細(xì)胞表面的CDg6降低更加顯著。單核細(xì)胞表面CD86分別與HLA-DR、CD86平均熒光強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系。 第二部分:血漿中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及CRP在燒傷后早期均升高,在傷后6天左右達(dá)到峰值,與正常對(duì)照比較有顯著差異。當(dāng)出現(xiàn)心衰、肺水腫、真菌感

11、染以及膿毒血癥等并發(fā)癥時(shí),它們升高更為明顯；輕重?zé)齻麅山M之間細(xì)胞因子未見明顯差別。單核細(xì)胞表面CD86與IL-10之間呈負(fù)相關(guān)。單核細(xì)胞表面標(biāo)記CD86與IL-1β、IL-6、IL-8、CRP未見明顯相關(guān)性。CD86MFI與細(xì)胞因子之間未見明顯相關(guān)性。 研究結(jié)論： 1.在燒傷后早期,單核細(xì)胞表面分子CD86下降與機(jī)體內(nèi)免疫狀態(tài)變化以及病情輕重的相關(guān),可見單核細(xì)胞表面CD86的變化對(duì)臨床治療和預(yù)后的判斷有所幫助。