熱應(yīng)激聯(lián)合脂多糖對(duì)人血單核細(xì)胞功能活性和表面分子的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　中暑是一種嚴(yán)重威脅人民健康和生命的疾病，主要表現(xiàn)為高體溫（超40℃），而重癥中暑表現(xiàn)為以中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙（伴有驚厥、譫妄、昏迷）為突出表現(xiàn)的多臟器功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）。盡管臨床上采取積極的降溫并實(shí)施積極的臟器支持，但重癥中暑的生存率仍沒(méi)有很大的改善。本研究以人血單核細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)熱應(yīng)激聯(lián)合脂多糖刺激體外模擬重癥中暑，觀察人血單

2、核細(xì)胞活性功能和表面分子變化，探索分析重癥中暑炎癥反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制為重癥中暑的臨床救治提供可能的指導(dǎo)方向。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　?、賹?shí)驗(yàn)對(duì)象為人外周血經(jīng)過(guò)ficoll密度梯度離心法分離并貼壁培養(yǎng)后獲得的人血單核細(xì)胞。
　?、诮釕?yīng)激聯(lián)合脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）雙重打擊人血單核細(xì)胞模型：人血單核細(xì)胞于43℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)30分鐘后，再用500ng/mLLPS刺激培養(yǎng)12小時(shí)。
　?、蹮釕?yīng)

3、激聯(lián)合LPS雙重打擊人血單核細(xì)胞功能活性檢測(cè)：ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中炎癥介質(zhì)含量白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)、白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）。
　?、蹹CFHDA探針熒光染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS）水平；使用吞噬熒光微球法，熒

4、光顯微鏡下觀察吞噬熒光微球的人血單核細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)吞噬熒光微球數(shù)目。
　?、轃釕?yīng)激聯(lián)合LPS雙重打擊人血單核細(xì)胞表面分子表達(dá)檢測(cè)：流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分子，包括CD86、髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)和 Toll樣受體4(Tolllikereceptors4,TLR4)；實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Poly

5、merase Chain Reaction，RT-PCR)檢測(cè)TREM-1和TLR4的mRNA水平；蛋白質(zhì)免疫印跡(western blot，WB)檢測(cè)TREM-1和TLR4蛋白水平的表達(dá)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　?、贌釕?yīng)激聯(lián)合LPS刺激升高人血單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β及IL-10濃度，增強(qiáng)人血單核細(xì)胞炎癥分泌活性。
　?、跓釕?yīng)激聯(lián)合LPS刺激增加人血單核細(xì)胞內(nèi)活性氧簇（ROS）表達(dá)，增強(qiáng)人血單核細(xì)胞氧化分

6、泌活性。
　?、蹮釕?yīng)激打擊抑制人血單核細(xì)胞吞噬功能，較單純熱應(yīng)激打擊，熱應(yīng)激聯(lián)合LPS對(duì)人血單核細(xì)胞吞噬功能抑制作用更為明顯。
　?、軣釕?yīng)激聯(lián)合LPS刺激降低人血單核細(xì)胞表面分子CD86表達(dá)率，增加人血單核細(xì)胞表面分子TREM-1和TLR4表達(dá)率。
　　⑤熱應(yīng)激聯(lián)合LPS刺激增加人血單核細(xì)胞表面分子TREM-1和TLR4蛋白和mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　熱應(yīng)激聯(lián)合LPS刺激增強(qiáng)人血單核細(xì)胞炎癥氧化分