濟(jì)寧青山羊皮膚毛囊體外培養(yǎng)和基因表達(dá)差異研究.pdf

1、濟(jì)寧青山羊是具有獨(dú)特毛色和花形的羔皮用山羊品種，其主要產(chǎn)品是猾子皮、板皮和山羊絨。羔羊生后1-3天內(nèi)屠宰后得到的猾子皮具有天然的色彩和花紋，毛色品質(zhì)好，光潤(rùn)，皮板輕巧而美觀?；悠に频姆ひ潞兔鳖I(lǐng)等在國(guó)際市場(chǎng)上極為暢銷，享有盛譽(yù)。本研究主要采用組織學(xué)技術(shù)和差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR(DDRT-PCR)等分子細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，對(duì)濟(jì)寧青山羊的皮膚毛囊組織結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)差異進(jìn)行了研究，研究結(jié)果有助于揭示動(dòng)物毛囊器官的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律；并為揭示濟(jì)寧青山

2、羊猾子皮花紋品質(zhì)的分子遺傳機(jī)理奠定基礎(chǔ)。 本文首先以組織學(xué)方法，研究了濟(jì)寧青山羊猾子皮和成年羊皮膚毛囊的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：猾子皮的毛囊與表皮呈45度傾斜，密度較稀。成年羊皮膚初級(jí)毛囊的毛球較大，毛囊較粗長(zhǎng)，具有汗腺、皮脂腺、豎毛肌等附屬結(jié)構(gòu)，毛干有髓質(zhì)：次級(jí)毛囊的毛球較小，皮脂腺不發(fā)達(dá)或缺如，毛干沒有髓質(zhì)。 比較了揉后小猾皮和大猾皮的品質(zhì)和組織學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。結(jié)果表明：小猾皮干皮重平均為88.75±11-33，比大猾皮(

3、出生30-60日齡)的皮板(重159.83±10.72)輕?。河谢娣e比例為67.84±2.97，明顯高于大猾皮(60.00±7.39)，且優(yōu)等的波浪花所占比例較高；單位皮重面積產(chǎn)率(14.83±1.49)亦高于大猾皮(12.98±0.61)。但是，小猾皮的抗張強(qiáng)度、撕裂強(qiáng)度、崩裂強(qiáng)度均不及大猾皮。大猾皮與小猾皮皮厚的差異極顯著(P＜0.01)；大猾皮各個(gè)部位皮厚的部位差差異不顯著(P＞0.05)：而小猾皮各個(gè)部位皮厚的部位差明顯大于大

4、猾皮，且差異顯著(P＜0.05)。 濟(jì)寧青山羊是生產(chǎn)猾子皮的一個(gè)專用品種，今后應(yīng)加強(qiáng)該品種的選育和改良，增大羊的體型，提高猾皮總面積、波浪花的比例和皮板的物理機(jī)械指標(biāo)，以便獲得品質(zhì)更好的猾子皮，進(jìn)一步提高經(jīng)濟(jì)效益。 進(jìn)一步采用差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，研究了濟(jì)寧青山羊胎兒期、小猾皮和大猾皮皮膚組織的基因表達(dá)差異，結(jié)果表明：8種引物組合在3個(gè)年齡段的青山羊皮膚組織中共擴(kuò)增出482條清晰可辯的條帶，其中，在三個(gè)發(fā)育階段的皮膚

5、組織中未發(fā)現(xiàn)“有或無”的差異表達(dá)條帶；但發(fā)現(xiàn)了99條表達(dá)“強(qiáng)或弱”的差異表達(dá)片段，占總條帶數(shù)的20.54％。若進(jìn)一步對(duì)這些差異表達(dá)條帶進(jìn)行回收、雜交驗(yàn)證和克隆測(cè)序，則有望得到與毛囊生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的差異表達(dá)基因。 采用三因子三水平的拉丁方正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)(L9(34))方法，對(duì)比研究了無血清的WilliamsE培養(yǎng)基、無血清的DMEM培養(yǎng)基和添加10％FCS(胎牛血清)的DMEM培養(yǎng)基，及其在三種培養(yǎng)基中分別添加0、2ng/mL和10n

6、g/mL三種不同濃度的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)和表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGF)時(shí)對(duì)成年羊毛囊體外培養(yǎng)的影響。將山羊的單根毛囊完整地從皮膚組織中分離出來，同時(shí)平行培養(yǎng)在9種培養(yǎng)基中，借助于倒置顯微鏡和目鏡測(cè)微尺隨時(shí)不斷地觀察毛囊生長(zhǎng)的形態(tài)變化和測(cè)量毛根的長(zhǎng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：山羊游離毛囊在9種培養(yǎng)基中均能很好地生長(zhǎng)；但以無血清的培養(yǎng)基和在WilliamsE培養(yǎng)基的效果最好；分別和同時(shí)添加2％-10％的VEGF和EGF時(shí)可加快毛囊的生長(zhǎng)；添加