乙肝病毒X蛋白經(jīng)p53非依賴途徑抑制依托泊苷誘導(dǎo)的Hep3B細(xì)胞凋亡.pdf

1、背景和目的:肝癌是全球范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一,而乙型肝炎病毒慢性感染是導(dǎo)致原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)生的重要原因之一。我國屬HBV感染高流行區(qū),超過半數(shù)的肝癌患者存在乙型肝炎病毒感染。HBV是一種基因組很小的DNA病毒,其編碼的X蛋白具有多種生物學(xué)功能,特別是對凋亡的影響與肝癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系。以往的一些研究結(jié)果顯示在與HBV感染相關(guān)的肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)HBx能與p53蛋白結(jié)合,發(fā)揮其生物學(xué)作用,p53是一個(gè)重要的腫瘤抑制基因,其介導(dǎo)的細(xì)胞信號

2、傳導(dǎo)通路途徑在調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生命活動中起重要作用,但是肝癌病人的p53表達(dá)通常都是異常和失活的,因此探討HBx在p53缺失的肝癌細(xì)胞系Hep3B上對凋亡的影響將作為本研究的關(guān)注點(diǎn)。
　　方法:將Hep3B接種于6孔板中,第二天用質(zhì)粒pHBx-EGFP和pEGFP瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后48h用100μM的Etoposide誘導(dǎo)凋亡,3h后收獲細(xì)胞,先用DAPI染色觀察核固縮現(xiàn)象,再運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的變化,并進(jìn)一步通過RT-qP

3、CR和Western blot的方法發(fā)現(xiàn)凋亡相關(guān)基因的變化。
　　結(jié)果:經(jīng)Etoposide誘導(dǎo)的Hep3B-HBx-EGFP及Hep3B-EGFP細(xì)胞都有核固縮現(xiàn)象和凋亡的sub-G1期峰,但Hep3B-HBx—EGFP中細(xì)胞凋亡的比例低于Hep3B-EGFP細(xì)胞,RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)與轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒pEGFP組相比,轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pHBx-EGFP組的Bcl-2mRNA的表達(dá)明顯增加,而caspase3、caspase8和caspa