褪黑素通過調(diào)節(jié)急性胰腺炎大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞p38與NF-κB通路改變細(xì)胞因子的產(chǎn)生.pdf

1、目的：
　　研究和探討褪黑素對(duì)急性胰腺炎大鼠模型的保護(hù)作用以及其可能的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：
　　1.將48只雄性SD大鼠隨機(jī)分成四組，分別為假手術(shù)組(sham operation，SO)，急性胰腺炎組(severe acute pancreatitis，SAP)，褪黑素治療組(melatonintreatment，MLT)和p38抑制劑(SB203580)治療組(SB)。
　　2.誘導(dǎo)大鼠SAP:通過腹腔注射4

2、％水合氯醛（0.7-0.8ml/kg）麻醉大鼠，打開腹腔后，采用逆行胰膽管注射牛黃膽酸鈉造模。SO組翻動(dòng)胰腺、十二指腸數(shù)次，SAP組緩慢勻速推注5％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)，MLT組在誘導(dǎo)SAP前30min經(jīng)腹腔注射4％MLT(50mg/kg)，SB組在誘導(dǎo)SAP前30min經(jīng)尾靜脈注射0.5mg/kg SB203580，造模成功后逐層關(guān)腹，并于大鼠背部皮下分點(diǎn)注射2.0ml生理鹽水以補(bǔ)充水分。
　　3.造模成功后的6小

3、時(shí)與12小時(shí)分別通過抽取腹主動(dòng)脈血處死每組六只大鼠，隨后立即用大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液分離所采集血液中的單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)并檢測(cè)血液中血淀粉酶濃度和腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-1（IL-1）、白介素-6(IL-6)的表達(dá)（ELISA法），同時(shí)立刻取下部分胰腺組織用4％多聚甲醛固定待做病理檢查（HE染色法）。PBMCs中的p38與NF-κB的表達(dá)通過蛋白免疫印跡法(Western blot)測(cè)定。
　　結(jié)果：

4、　　1.成功建立大鼠急性胰腺炎(SAP)模型
　　2.胰腺組織病理
　　與SO組大鼠比較，SAP組大鼠在6小時(shí)與12小時(shí)胰腺組織都表現(xiàn)出不同程度的組織病理?yè)p傷，并且隨著時(shí)間推移損傷程度逐漸加重，MLT組與SB組大鼠胰腺組織與同時(shí)間點(diǎn)SAP組大鼠比較組織損傷程度顯著減輕(P＜0.01)。
　　3.血淀粉酶濃度與細(xì)胞因子表達(dá)
　　SAP組在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)同SO組比較，血淀粉酶濃度都顯著升高(P＜0.01)，并且隨著時(shí)間推

5、移進(jìn)行性加重。MLT組與SB組血淀粉酶濃度與相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SAP組比較顯著降低(P＜0.01)。同樣的，TNF-α、IL-1、IL-6在SAP組中的表達(dá)較相應(yīng)SO組明顯升高(P＜0.01)，而MLT組與SB組血中各細(xì)胞因子表達(dá)與相對(duì)應(yīng)時(shí)點(diǎn)SAP組比較受到顯著抑制(P＜0.01)。
　　4.外周血單個(gè)核細(xì)胞p38與NF-κB的表達(dá)
　　SO組表達(dá)相對(duì)較少的磷酸化p38與磷酸化NF-κB，造模成功后6小時(shí)與12小時(shí)SAP組的磷酸化

6、p38與磷酸化NF-κB表達(dá)顯著提高(P＜0.01)，MLT組與SB組同SAP組比較在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著抑制了p38的磷酸化，MLT組與SAP組比較，在各時(shí)間點(diǎn)均有效抑制NF-κB的磷酸化，SB組與SAP組比較在12小時(shí)顯著抑制NF-κB的磷酸化，然而在6小時(shí)未能顯著減少NF-κB的磷酸化。
　　結(jié)論：
　　1.急性胰腺炎能上調(diào)TNF-α、IL-1、IL-6的表達(dá)，并能被褪黑素與P38抑制劑顯著抑制。
　　2.急性胰腺炎