過(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷大鼠腎組織NOD2及IL-6表達(dá)以及山莨菪堿干預(yù)作用的研究.pdf

1、目的:過(guò)度訓(xùn)練可導(dǎo)致急性腎損傷，嚴(yán)重者可危及生命，因此探討其發(fā)病機(jī)制和防治措施具有重要的臨床意義。本課題組以往的研究表明，炎癥反應(yīng)參與了過(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷(overtraining-induced acute kidneyinjury, OTIAKI)的發(fā)生和發(fā)展，山莨菪堿能夠減輕過(guò)度訓(xùn)練造成的急性腎損傷，但其確切機(jī)制尚不完全清楚。研究表明，核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白2(nucleotide-binding oligomerizati

2、on-2，NOD2)、促炎因子白介素-6(interleukin-6，IL-6)在炎癥反應(yīng)性疾病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，參與了腎缺血再灌注損傷時(shí)的炎癥反應(yīng)過(guò)程，但它們?cè)谶^(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷中的作用尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究擬通過(guò)大鼠游泳至力竭建立過(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷模型，研究OTIAKI時(shí)腎組織細(xì)胞中NOD2和IL-6的表達(dá)情況，探討NOD2及IL-6在急性腎損傷中的作用機(jī)制，觀察山莨菪堿對(duì)OTIAKI大鼠腎組織NOD2和IL-6表達(dá)的影響，為

3、過(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷的防治靶點(diǎn)及新藥的設(shè)計(jì)提供思路。
　　方法:
　　1.清潔級(jí)健康雄性SD大鼠36只，體重180～200g，隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組(CN，n=6)，力竭組(ES，n=18)和山莨菪堿組(AD，n=12)。按力竭后即刻、6h和24h，ES組又分為ESI組、ES6h組和ES24h組3個(gè)亞組(n=6）;AD組又分AD6h組和AD24h組2個(gè)亞組(n=6）。CN組不進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng);ES組和AD組于力竭前20 min

4、分別腹腔注射滅菌注射用水2ml/kg和山莨菪堿注射液10 mg/kg。
　　2.采用大鼠單次無(wú)負(fù)重游泳至力竭法建立過(guò)度訓(xùn)練致急性腎損傷動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)在安靜環(huán)境中進(jìn)行。采用自制玻璃鋼游泳池(150cm×60cm×80cm)，水深70cm左右，水溫保持在30±2℃.為保證大鼠有足夠的游泳空間及避免觀察不及時(shí)大鼠發(fā)生溺水，每次各組取1只大鼠游泳。
　　3.腹腔注射10％水合氯醛(0.6ml/kg)麻醉，腹部消毒后沿腹正中切開(kāi)，下腔

5、靜脈取血，采用AU2700全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;在冰上摘取雙腎，右腎置于4℃4％多聚甲醛中固定，用于HE染色觀察腎組織病理變化，免疫組化法檢測(cè)腎組織NOD2的表達(dá)及分布;左腎迅速放于凍存管中，置于-80℃冰箱保存，待westernblotting法測(cè)定腎組織NOD2的表達(dá)和ELISA法測(cè)定腎組織IL-6的表達(dá)。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)分布的定量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((

6、x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Kuels檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況:CN組大鼠反應(yīng)靈敏，活動(dòng)自如，正常進(jìn)食、水。ES組大鼠反應(yīng)遲鈍，精神萎靡，呼吸急促，站立不穩(wěn)，全身肌肉顫抖，運(yùn)動(dòng)失協(xié)調(diào)，球結(jié)膜充血，飲水和進(jìn)食量明顯減少。AD組一般情況較同期ES組好。
　　2.腎組織病理變化:CN組大鼠腎組織未見(jiàn)明顯病理變化;ESI組可見(jiàn)

7、腎小管上皮細(xì)胞輕度水腫; ES6h組可見(jiàn)有少部分的腎小球球囊擴(kuò)張，腎小管管腔輕度擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞水腫，有空泡狀變性，局部充血，部分刷狀緣可見(jiàn)不規(guī)整，局部有脫落，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯;ES24h組腎小管管腔明顯擴(kuò)張，刷狀緣不規(guī)整、有脫落，上皮細(xì)胞重度水腫，局部充血。與同期ES組比較，AD組腎組織病理改變明顯減輕;
　　3.與CN組比較，ESI組和ES6h組血清Cr、BUN升高，其中ES6h組達(dá)高峰(P＜0.05）;與同期ES組比較，

8、AD6h組血清Cr、BUN降低，但仍高于CN組水平(P＜0.05);
　　4.ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示: ESI組及ES6h組與CN組比較，腎組織IL-6表達(dá)上調(diào)，ES6h組達(dá)高峰(P＜0.05），ES24h組恢復(fù)至CN組水平;AD6h組與ES6h組比較，腎組織IL-6表達(dá)下調(diào)(P＜0.05）;
　　5.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果示NOD2陽(yáng)性表達(dá)主要分布在近端小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，腎小球及腎間質(zhì)未見(jiàn)明顯表達(dá)。半定量分析及wester

9、n blotting結(jié)果示:ESI組及ES6h組與CN組比較，腎組織NOD2表達(dá)上調(diào)，ES6h組表達(dá)最高（P＜0.05）;與ES同期亞組比較，AD組腎組織NOD2表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.過(guò)度訓(xùn)練致大鼠急性腎損傷時(shí)，腎組織NOD2和IL-6表達(dá)上調(diào)，提示炎癥反應(yīng)在OTIAKI中發(fā)揮重要作用。
　　2.山莨菪堿可部分逆轉(zhuǎn)OTIAKI時(shí)腎組織NOD2和IL-6表達(dá)的上調(diào)，減輕了過(guò)度訓(xùn)練引起的急性腎損傷