Rho-ROCK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵蛋白在過度訓(xùn)練致大鼠急性腎損傷中的作用及山莨菪堿、法舒地爾干預(yù)的影響.pdf

1、目的:在體育運(yùn)動(dòng)和軍事訓(xùn)練中，可發(fā)生因過度訓(xùn)練而導(dǎo)致的急性腎損傷(overtraining-induced acute kidney injury, OTIAKI)，其發(fā)病率呈逐年增高趨勢，病死率較高，可達(dá)25％[1]，因此探討其致病機(jī)制和防治措施具有重要的臨床及軍事意義。研究表明，Rho/ROCK信號(hào)通路可通過破壞細(xì)胞骨架、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、激活炎癥反應(yīng)、介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞收縮等多種作用導(dǎo)致急性腎損傷[2-5]，而其是否參與了OTIAKI

2、的病理生理過程，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過大鼠游泳致力竭，建立大鼠過度訓(xùn)練致急性腎損傷模型，擬評(píng)價(jià)OTIAKI時(shí)大鼠腎組織Rho/ROCK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)變化及其意義，觀察山莨菪堿、法舒地爾對(duì)其表達(dá)變化的影響，為臨床研究提供參考。
　　方法:
　　1.清潔級(jí)雄性SD大鼠54只，體重180～200g，隨機(jī)分為4組:對(duì)照組(CN，n=6)、力竭組(ES，n=18)、山莨菪堿組(AD，n=12)和法舒地爾組(FA，n=

3、18)。按大鼠力竭后即刻、6h和24 h，ES組又分為ESI、ES6h和ES24h3個(gè)亞組（n=6）;AD組又分為AD6h和AD24h2個(gè)亞組(n=6);FA組又分為FAI、FA6h和FA24h3個(gè)亞組(n=6)。CN組不進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng);ES組、AD組和FA組大鼠于力竭運(yùn)動(dòng)前20 min分別腹腔注射滅菌注射用水2 ml/kg、山莨菪堿10 mg/kg和法舒地爾15 mg/kg。采用大鼠無負(fù)重單次游泳至力竭法建立過度訓(xùn)練大鼠模型。
　

4、　2.腹腔注射10％水合氯醛0.6ml/kg麻醉，腹正中切開，下腔靜脈取血，采用全自動(dòng)生化儀測定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。摘取雙腎，左腎放入凍存管置-80℃冰凍保存，待Western Blotting檢測腎組織ROCK-1的表達(dá)和肌球蛋白磷酸酶目標(biāo)亞單位-1(MYPT1)的磷酸化水平。右腎縱向切開，置于4℃4％多聚甲醛中固定，制作石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察腎組織病理變化。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS13.0

5、軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，正態(tài)分布的定量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.CN組大鼠飲食正常，皮毛光滑亮澤，活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏。ES組大鼠力竭后全身顫動(dòng)不止，精神萎靡，活動(dòng)困難，無法站立，球結(jié)膜充血，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍;AD組和FA組大鼠力竭后，一般狀況及精神情況均較ES組好。
　　2.腎功能結(jié)果:與CN組比較

6、，ESI、ES6h組血清BUN、Cr升高，ES6h達(dá)高峰(P＜0.05），ES24h組恢復(fù)到CN組水平（P＜0.05）;與ES同期亞組比較，AD6h組、FAI和FA6h組血清BUN、Cr降低(P＜0.05），未恢復(fù)到CN組水平(P＜0.05); AD24h和FA24h組恢復(fù)到CN組水平（P＞0.05）。
　　3.腎組織病理結(jié)果:CN組腎組織無明顯病理變化。ESI和ES6h組可見腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞水腫;ES24h組可見腎小管

7、明顯擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)胞刷狀緣不規(guī)整、脫落。與ES同期亞組比較，AD和FA各亞組腎組織病理改變均有所減輕。
　　4.WesternBlotting法檢測結(jié)果:與CN組比較，ES組ROCK-1和P-MYPT1表達(dá)上調(diào)，ES6h組表達(dá)最高(P＜0.05）;與ES同期亞組比較，AD組、FA組ROCK-1和P-MYPT1表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.過度訓(xùn)練致大鼠急性腎損傷時(shí)，腎組織ROCK-1和P-MYPT

8、1表達(dá)增多，用Rho激酶特異性抑制劑法舒地爾預(yù)先干預(yù)后可逆轉(zhuǎn)這種變化，提示Rho/ROCK信號(hào)通路可能在過度訓(xùn)練致大鼠腎損傷中發(fā)揮重要作用。
　　2.山莨菪堿可減少OTIAKI時(shí)腎組織ROCK-1和P-MYPT1的表達(dá)，提示山莨菪堿可通過部分抑制Rho/ROCK信號(hào)通路來減輕過度訓(xùn)練大鼠腎組織損傷，從而起到腎臟保護(hù)作用。
　　3.法舒地爾作為Rho激酶特異性抑制劑，對(duì)過度訓(xùn)練致急性腎損傷有保護(hù)作用，為OTIAKI的臨床研究提