馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯的抗性風(fēng)險評估及抗性分子機制研究.pdf

1、本論文采用菌絲生長抑制法測定了2007年采自黑龍江和河北省的59株馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈和嘧菌酯的敏感性,建立了該菌對嘧菌酯的敏感基線,進行了馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯的室內(nèi)抗藥性突變體的誘導(dǎo)和抗性風(fēng)險評估,并開展了抗性機制的研究： 1 馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈和嘧菌酯的敏感性測定采用菌絲生長抑制法對采自黑龍江和河北省的59株馬鈴薯晚疫病菌進行了敏感性測定,結(jié)果表明河北省20株馬鈴薯晚疫對甲霜靈的抗性頻率為100％,黑龍江的39株菌株

2、敏感的占20.51％,抗性菌株占74.36％,抗性頻率也達到相當(dāng)高的水平。 嘧菌酯對59株馬鈴薯晚疫的EC50值介于0.0062μg/mL～0.1474μg/mL之間,平均EC50為0.0581(±0.0307)μg/mL,MIC均小于1μg/mL,不同菌株對嘧菌酯的敏感性頻率分布呈連續(xù)性單峰曲線,接近正態(tài)分布,尚未出現(xiàn)敏感性明顯下降的抗藥群體,因此供試菌株的平均EC50值可作為馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯的敏感性基線用于將來開展田間

3、抗性監(jiān)測。 2 馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯的室內(nèi)抗藥性風(fēng)險評估在室內(nèi)采用紫外誘變和藥劑馴化的方法均獲得了馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯的抗性突變體,共獲得4株抗嘧菌酯的突變體,其中兩株抗性指數(shù)較低,兩株(N2-4和N2-5)抗性指數(shù)較高分別為20.94和52.87倍。紫外誘變方法較藥劑馴化方法更易于獲得抗藥性突變體,且其抗性水平高于藥劑馴化方法。部分生物學(xué)性狀研究顯示,突變體的抗藥性狀穩(wěn)定、產(chǎn)孢子囊能力、致病力與親本敏感菌株相比沒有顯著差異

4、。嘧菌酯與醚菌酯和烯肟菌酯之間存在正交互抗藥性,與霜脲氰、烯酰嗎啉、和代森猛鋅之間均無交互抗藥性。綜合分析表明,馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯具有較高的抗藥性風(fēng)險,建議生產(chǎn)上應(yīng)將嘧菌酯與其它無交互抗性的藥劑交替使用或混合使用,以避免或延緩抗藥性的產(chǎn)生。 3 馬鈴薯晚疫病菌對嘧菌酯抗藥性機制病原菌抗藥性分子機制研究結(jié)果表明,與敏感菌株線粒體Cytb基因部分氨基酸序列比對,低抗菌株A32-5氨基酸序列中的98位由Phe突變?yōu)長cu(F99L

5、);N2-10氨基酸序列中的339位由Ile突變?yōu)锳sn(B39N);室內(nèi)抗藥性水平較高的突變體N-4和N-5氨基酸突變位點相同,均為氨基酸序列中的137位由Gly突變?yōu)镚lu(G137E);其中N2-5的869為堿基也發(fā)生了變化,由A變成了G,但氨基酸序列沒有發(fā)生變化。根據(jù)相關(guān)甲氧基丙烯酸酯的抗性研究報道,抗性突變體發(fā)生突變的區(qū)域主要集中在Cytb序列上的氨基酸127～147和275～296位,不同的突變位點代表了不同抗性水平,在12

6、7～147位發(fā)生突變,表現(xiàn)高水平的抗藥性,因此推測馬鈴薯晚疫病菌線粒體中Cytb基因的137位氨基酸的突變是靶標(biāo)菌對嘧菌酯產(chǎn)生抗性的主要原因。 4 嘧菌酯與霜脲氰、烯酰嗎啉和代森錳鋅復(fù)配對馬鈴薯晚疫病菌的聯(lián)合毒力嘧菌酯與3個無交互抗藥性的殺菌劑按不同比例混配后的聯(lián)合毒力測定表明,嘧菌酯與霜脲氰、烯酰嗎啉按1:(1,2,3,4,5)混配對馬鈴薯晚疫病菌,均無增效作用；嘧菌酯與代森錳鋅按(1:4、1:8、1:12、1:16、1:20)進行混