FA-BSA修飾磁性膠束的制備及其應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　制備FA-BSA修飾的高分子聚合物磁性膠束作為腫瘤特異性靶向磁共振對比劑，用于腫瘤靶向磁共振成像。
　　方法：
　　1.合成：（1）采用化學(xué)共沉淀法及油酸修飾制備單分散的磁性納米粒子（SPIONs）；（2）采用自由基聚合法合成陽離子兩親高分子聚合物（poly(HFMA-co-MOTAC)-g-PEGMA）；（3）采用自組裝技術(shù)制備陽離子高分子聚合物磁性膠束（簡稱“未修飾的磁性膠束”）；（4）陽離子磁性膠束與

2、FA-BSA通過靜電相互作用最終合成FA-BSA修飾的磁性膠束。
　　2.表征：（1）使用1H NMR觀察兩親高分子聚合物的化學(xué)組成，使用FTIR觀察磁性納米粒子、高分子聚合物和FA-BSA修飾的磁性膠束的化學(xué)結(jié)構(gòu)；（2）電鏡觀察磁性膠束的物理形態(tài)和大小，DLS檢測磁性膠束的水合粒徑及分布；（3）使用熱重分析磁性膠束的載鐵含量，繪制磁滯回線觀察所制備膠束的磁性特點(diǎn)；（4）用3T磁共振掃描機(jī)及腕關(guān)節(jié)線圈，采用多回波T2WI磁共振成像

3、方法檢測磁性膠束的橫向弛豫率。
　　3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：（1）使用MTT法檢測磁性膠束的細(xì)胞毒性；（2）細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)：將不同濃度的FA-BSA修飾的磁性膠束和未修飾的磁性膠束分別與人肝癌細(xì)胞Bel-7402（葉酸受體陽性表達(dá)）和Hep3B（葉酸受體陰性表達(dá)）共培養(yǎng)，其中未修飾的磁性膠束作為對照，分別采用磁共振成像、細(xì)胞鐵含量測定、普魯士藍(lán)染色的方法，對于兩種腫瘤細(xì)胞對兩種磁性膠束的攝取量進(jìn)行定性、定量及病理分析。
　　4.體內(nèi)

4、實(shí)驗(yàn)：（1）制備裸鼠肝癌皮下瘤模型；（2）載瘤動物活體磁共振成像：尾靜脈注射四種不同的造影劑，包括T1對比劑Gd-DTPA，T2對比劑Feridex，以及合成的未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束，觀察所制備的FA-BSA修飾的磁性膠束對載瘤動物活體磁共振成像的效果。其中釓、菲立磁與單純磁性膠束作為對照。（3）組織化學(xué)分析：對肝臟和腫瘤組織進(jìn)行鐵特異性普魯士藍(lán)染色,定性分析磁性膠束在肝臟和腫瘤組織中的分布和含量；（4）腫瘤組織鐵定

5、量測定，載瘤裸鼠尾靜脈注射未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束，24h后定量測定腫瘤組織的鐵含量。
　　結(jié)果：
　　1.成功合成未修飾的磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束；
　　2.表征：（1）1H NMR、FTIR結(jié)果從化學(xué)結(jié)構(gòu)上證明磁性膠束合成成功；（2）電鏡顯示所合成的磁性膠束呈球形的殼-核結(jié)構(gòu)，DLS測得所合成的未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾磁性膠束平均水合粒徑分別為161.5nm（PDI=0.21）

6、、196.1nm(PDI=0.26)；(3)熱重分析未修飾磁性膠束與FA-BSA修飾磁性膠束的氧化鐵含量分別為27.5 wt％、19.2 wt%；磁滯回線測得二者的飽和磁化強(qiáng)度分別為13.9 emu/g、5.5 emu/g；（4）采用多回波T2WI磁共振掃描分析測定未修飾的磁性膠束與FA-BSA修飾的磁性膠束的橫向弛豫率分別為243.9 mM-1s-1、179.5 mM-1s-1。
　　3.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：（1）MTT法檢測不同濃度

7、兩種磁性膠束（從25μg/mL到100μg/mL）與正常肝細(xì)胞孵育24，48h，細(xì)胞活性均在80%以上，說明兩種磁性膠束沒有細(xì)胞毒性，可應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)；（2）細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)，無論是葉酸受體陽性的Bel-7402細(xì)胞，還是葉酸受體陰性的Hep3B細(xì)胞，兩者對FA-BSA修飾的磁性膠束的攝取均高于未修飾的磁性膠束；但是對于FA-BSA修飾的磁性膠束，Bel-7402的攝取量高于Hep3B細(xì)胞對其的攝取量；而對未修飾的磁性膠束，兩種腫瘤細(xì)胞Be

8、l-7402、Hep3B的攝取率基本相同；Hep3B、Bel-7402細(xì)胞對未修飾的磁性膠束攝取率分別為(6.17±0.19)%，(6.43±0.45)%；Hep3B、Bel-7402細(xì)胞對FA-BSA修飾的磁性膠束攝取率分別為(8.83±0.41)%，(12.07±1.29)%。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：（1）尾靜脈注射對比劑后1h-24h，F(xiàn)A-BSA修飾的磁性膠束實(shí)驗(yàn)組皮下瘤T2信號降低最明顯，而對照組（未修飾的磁性膠束及Feridex）腫瘤

9、信號改變程度較小。（2）肝臟普魯士藍(lán)染色結(jié)果表明Feridex在肝臟沉積較多，未修飾的磁性膠束在肝臟沉積較少，而FA-BSA修飾的磁性膠束在肝臟無明顯沉積。腫瘤普魯士藍(lán)染色結(jié)果表明FA-BSA修飾的磁性膠束在腫瘤組織的聚集明顯高于未修飾的磁性膠束；而Feridex組僅僅在腫瘤組織血管內(nèi)可以看到少許藍(lán)色顆粒，作為陰性對照Gd-DTPA組在腫瘤組織沒有看到藍(lán)色顆粒。（3）腫瘤組織鐵含量測定：腫瘤組織對未修飾的磁性膠束和FA-BSA修飾的磁性