雌激素和HSP27與冠心病的關(guān)系及其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響.pdf

1、研究背景:近年來(lái),冠心病(coronary heart disease,CHD)發(fā)病率逐年升高,已成為影響人類(lèi)健康的主要疾病之一。研究其病理生理機(jī)制并控制相應(yīng)的危險(xiǎn)因素是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的重要課題。目前認(rèn)為,冠心病的發(fā)病是在多種危險(xiǎn)因素作用下,是冠狀動(dòng)脈發(fā)生嚴(yán)重粥樣硬化性狹窄和阻塞,或在此基礎(chǔ)上合并痙攣以及血栓形成,血管阻塞,引起冠狀動(dòng)脈供血不足,心肌缺血或梗塞的一種心臟病。內(nèi)皮功能損傷、平滑肌細(xì)胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要機(jī)

2、制,其中炎性反應(yīng)貫穿整個(gè)過(guò)程。冠心病男女患病率差異極大,絕經(jīng)期前女性發(fā)病率與男性相比為1:3～1:10,絕經(jīng)后女性與男性趨于一致。這種差異不能完全由常見(jiàn)的冠心病危險(xiǎn)因素來(lái)解釋,提示與雌激素的水平有關(guān)。
　　雌激素在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用。雌激素能影響血脂代謝,可降低血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平,并升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C);雌激素具有抗氧化作用,本身可以清除自由基,并可抗脂質(zhì)過(guò)

3、氧化反應(yīng);雌激素可以改善內(nèi)皮功能,減少縮血管物質(zhì)的釋放,使血管擴(kuò)張從而增加血流量,還能刺激成熟內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮并產(chǎn)生抗內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和促增殖作用,同時(shí)它還可以加速血管損傷后的管壁的再內(nèi)皮化過(guò)程,這些方面都可以起抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。但雌激素的具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步深入研究。
　　血管內(nèi)皮是介于循環(huán)血液與血管平滑肌之間的生理屏障。內(nèi)皮功能障礙(Endothelial dysfunction,ED)是動(dòng)脈粥樣硬化(atherosc

4、lerosis,AS)之源,存在于A(yíng)S發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段,預(yù)防及控制內(nèi)皮功能障礙已成為防治冠心病的新趨勢(shì)。
　　熱休克蛋白27(Heat shock protein27,HSP27)是小分子量熱休克蛋白家族(Small Heat shock protein,sHSP)中的重要一員,在機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)下表達(dá)增加,通過(guò)分子伴侶作用、調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、抗細(xì)胞凋亡、抗氧化應(yīng)激和抗炎等作用保護(hù)細(xì)胞功能。最近有報(bào)導(dǎo)指出HSP27是一種動(dòng)脈粥樣硬化的

5、生物學(xué)標(biāo)志,血清HSP27水平與動(dòng)脈粥樣硬化程度呈負(fù)相關(guān)。HSP27可能成為心血管疾病治療的新靶點(diǎn)。
　　第一部分冠心病患者血清雌激素水平與HSP27和血脂水平的關(guān)系
　　目的:研究表明雌激素可通過(guò)調(diào)節(jié)脂代謝在心血管疾病中起保護(hù)作用。HSP27是一種動(dòng)脈粥樣硬化的生物學(xué)標(biāo)志物,血清HSP27水平與動(dòng)脈粥樣硬化程度呈負(fù)相關(guān)。HSP27可由雌激素誘導(dǎo)產(chǎn)生,是一種ERβ相關(guān)蛋白,并可與ERβ共同抑制雌激素信號(hào)。那么冠心病患者血清H

6、SP27水平與雌激素水平的相關(guān)性如何?血清HSP27水平是否與雌激素調(diào)節(jié)的血脂水平相關(guān)?HSP27是否參與雌激素對(duì)脂質(zhì)的調(diào)節(jié)?本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)收集冠心病患者和健康人血清,檢測(cè)血清HSP27、雌激素和血脂含量,來(lái)觀(guān)察雌激素與HSP27和血脂的相關(guān)性。
　　方法:按照研究入選標(biāo)準(zhǔn),調(diào)查2009年2月至2009年9月期間湖南省郴州市第一人民醫(yī)院心臟內(nèi)科住院的冠心病患者和健康體檢者。1.記錄研究對(duì)象的臨床資料:年齡、性別、身高、體重、心率、生

7、活習(xí)慣、糖尿病史、高血壓病史。2.使用Bayer ADVIA2400型全自動(dòng)生化分析儀,采用酶法檢測(cè)患者血脂水平。3.使用Bayer ADVIA Centaur型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,采用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清雌二醇(E2)水平。4.ELISA法檢測(cè)血清HSP27水平。
　　結(jié)果:CHD組年齡、BMI、高鹽飲食、吸煙、飲酒、糖尿病發(fā)病率、高血壓病發(fā)病率,均明顯高于健康對(duì)照組。血清E2、HSP27和血脂水平在CHD組與健康對(duì)照組之間

8、、女性CHD組與男性CHD組之間,以及女性CHD患者≤55歲組和>55歲組之間有顯著性差異。冠心病患者血清E2水平與HSP27及血脂水平之間的線(xiàn)性相關(guān)分析顯示:血清E2水平與TC、LDL-C之間呈顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù) r分別為-0.6669(P<0.05)、-0.5739(P<0.05);E2與 HDL-C、HSP27水平呈顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為0.7019(P<0.01)、0.7946(P<0.01);HSP27水平與血脂之間沒(méi)

9、有明顯相關(guān)性。
　　第二部分 HSP27對(duì)雌激素誘導(dǎo)的內(nèi)皮保護(hù)作用的影響
　　目的:第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示冠心病患者血清HSP27水平與雌激素水平相關(guān),HSP27不參與雌激素調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。那么HSP27是否參與雌激素的內(nèi)皮保護(hù)作用?外源性雌激素是否也能誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) HSP27表達(dá)增加,是否具有劑量依賴(lài)性?本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)不同濃度雌二醇(E2)及雌激素受體拮抗劑他莫昔芬(tamoxifen)處理HUVEC來(lái)觀(guān)察

10、HSP27表達(dá)的改變,以及通過(guò)HUVEC轉(zhuǎn)染HSP27 siRNA來(lái)觀(guān)察HSP27對(duì)雌激素內(nèi)皮保護(hù)作用影響。
　　方法:1.分別用不同濃度(10-9、10-8、10-7mol/L) E2處理 HUVEC24小時(shí);10-7mol/L雌二醇及10-6mol/L他莫昔芬處理HUVEC24小時(shí)。以空白組為陰性對(duì)照,RT-PCR和Western blot檢測(cè)HSP27的表達(dá)。2.分別轉(zhuǎn)染HSP27 siRNA和mock RNA48小時(shí)后,再

11、與10-7mol/L E2孵育24小時(shí)?？瞻捉M做為陰性對(duì)照,RT-PCR和Western blot檢測(cè)HSP27的表達(dá);分別用硝酸還原酶法和ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)基中NO和ET-1的含量;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞表面ICAM-1的含量。
　　結(jié)果:不管是mRNA水平還是蛋白水平,E2處理HUVEC可上調(diào)HSP27的表達(dá),并且具有劑量依賴(lài)性,表達(dá)的峰值在10-7mol/L。10-6mol/L他莫昔芬可阻斷10-7mol/L E2的作用。R

12、T-PCR、Western blot檢測(cè)HSP27 siRNA序列能明顯下調(diào)HSP27mRNA及蛋白的表達(dá)。HUVEC轉(zhuǎn)染 HSP27 siRNA48小時(shí)后再與10-7mol/L E2孵育24小時(shí),能顯著減弱E2對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO和ICAM-1的影響,而對(duì)ET-1沒(méi)有明顯影響。
　　結(jié)論:
　　1.冠心病患者血清E2水平與HSP27正相關(guān),雌激素的抗心血管病作用可能與HSP27有關(guān)。
　　2.E2可誘導(dǎo)HUVEC產(chǎn)生H