戊二醛聚合方法對(duì)血紅蛋白聚合產(chǎn)物免疫學(xué)特性的影響.pdf

1、血紅蛋白類氧載體(Hemoglobin—based oxygen carriers，HBOCs)是一類通過血紅蛋白分子表面化學(xué)修飾或分子間交聯(lián)而形成分子量較大的血紅蛋白制品，原料血紅蛋白主要來源于人、豬、牛，常用戊二醛作為交聯(lián)劑，具有無病原微生物污染、制劑組成相對(duì)簡單、可長期體外保存、使用時(shí)不需要交叉配型等優(yōu)點(diǎn)。但此類制劑也存在潛在的問題，即異源蛋白和蛋白質(zhì)修飾/聚合反應(yīng)可能使得此類產(chǎn)品刺激或抑制機(jī)體免疫系統(tǒng)功能，從而影響機(jī)體體液免疫和

2、細(xì)胞免疫，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫毒性作用。免疫原性是免疫毒性評(píng)價(jià)的重要組成部分，目前已成為研究重點(diǎn)。本文主要采用抗體生成反應(yīng)方法，初步研究了戊二醛聚合反應(yīng)前后豬、牛血紅蛋白的免疫原性所發(fā)生的變化，以研究聚合反應(yīng)對(duì)此兩類蛋白免疫原性的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，首先豬、牛血紅蛋白刺激機(jī)體生成抗體的作用都很弱，但經(jīng)過戊二醛聚合后體液免疫刺激作用明顯增強(qiáng)；其次，抗牛血紅蛋白抗體不識(shí)別聚合牛血紅蛋白，抗分子內(nèi)聚合牛血紅蛋白抗體也不識(shí)別天然牛血紅蛋白，

3、而分子間聚合牛血紅蛋白抗體卻可以識(shí)別天然的牛血紅蛋白；最后，抗豬血紅蛋白抗體可識(shí)別聚合豬血紅蛋白，抗聚合豬血紅蛋白抗體也可識(shí)別天然豬血紅蛋白。 可見，豬、牛血紅蛋白免疫原性很低，但是戊二醛聚合反應(yīng)改變了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使其免疫刺激作用顯著增強(qiáng)，提高了豬、牛血紅蛋白刺激機(jī)體生成抗體的能力。另外，不同蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變對(duì)免疫原性產(chǎn)生影響的機(jī)理可能不同。戊二醛分子內(nèi)聚合反應(yīng)可能沒有改變豬血紅蛋白抗原決定簇的結(jié)構(gòu)，但卻改變了牛血紅蛋白抗

4、原決定簇的結(jié)構(gòu)，而分子間聚合對(duì)牛血紅蛋白抗原決定簇沒有影響。戊二醛聚合反應(yīng)可造成此兩類蛋白免疫學(xué)性質(zhì)發(fā)生不同改變的事實(shí)說明，雖然不同種血紅蛋白的氨基酸序列具有很高的相似性，但聚合反應(yīng)所產(chǎn)生的免疫學(xué)特性的影響可能完全不同。這種影響與聚合反應(yīng)所修飾的蛋白質(zhì)的部位及其相鄰空間結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)有密切關(guān)系。同種化學(xué)修飾方法制備的不同來源血紅蛋白的聚合產(chǎn)物可具有不同的免疫學(xué)刺激特性，而不同種化學(xué)修飾方法制備的相同來源血紅蛋白產(chǎn)物也具有不同的免疫學(xué)特性。