銀杏黃酮苷元對ox-LDL誘導的內皮細胞NF-κB、ICAM-1、VCAM-1及MCP-1表達的影響.pdf

1、研究背景：AS是慢性血管炎性損傷性疾病，ox-LDL可以誘導NF-κB的核位移，刺激內皮細胞產生一系列依賴 NF-κB的黏附分子和趨化蛋白等炎癥因子分泌增加，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。近年國內外大量研究已經證實，銀杏葉提取物（GBE）可通過多種作用機制抑制AS的發(fā)生與發(fā)展，銀杏黃酮和萜內酯是其主要有效成分，銀杏黃酮苷元（GA）是銀杏黃酮去除糖苷鏈后的新型藥物,可以有效提高銀杏黃酮的生物活性。研究表明銀杏黃酮苷元具有抗AS的作用，但機

2、制尚未闡明。本實驗以人主動脈內皮細胞（HAECs）為研究對象，通過觀察GA對ox-LDL誘導的內皮細胞分泌ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的影響及NF-κB在其中的調控作用，探討GA對ox-LDL誘導內皮細胞炎癥損傷的影響，旨在為臨床使用這一新型藥物干預AS提供實驗依據。
　　目的：觀察 GA及其單體對 ox-LDL損傷后 HAECs的活力及形態(tài)的影響。觀察GA對ox-LDL誘導HAECs分泌炎癥因子ICAM-1、VCAM-

3、1、MCP-1的影響，及NF-κB在其中的調控機制。
　　方法：體外培養(yǎng) HAECs，將細胞隨機分為以下組別：（1）空白對照組：DMEM（2）GA各濃度組：不同濃度GA（10～100mg/L）分別與細胞培養(yǎng)24h（3）ox-LDL各濃度組：不同濃度 ox-LDL（50～200mg/L）分別與細胞共同培養(yǎng)24h（4） ox-LDL+GA及其單體組：不同濃度的GA（30～90mg/L）、槲皮素（15～90 mg/L）、山奈酚（30～1

4、50 mg/L）、異鼠李素（30～150 mg/L）分別與細胞培養(yǎng)1h，后加入150mg/Lox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24h（5）ASP+ox-LDL組：1mmol/LASP與細胞預先培養(yǎng)1h，后加入150mg/Lox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24h。采用MTT法觀察內皮細胞活力，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，免疫熒光法檢測細胞核內NF-κB的激活，ELISA法檢測MCP-1、ICAM-1及VCAM-1水平。
　　結果：1、10～90mg/L G

5、A與HAECs共同培養(yǎng)24小時細胞形態(tài)基本正常，細胞活性均大于空白對照組（P＜0.05），其中60mg/LGA組細胞活性最高。2、50～200mg/L ox-LDL與HAECs共同培養(yǎng)6～48h后，隨藥物濃度的增加和作用時間的延長，各組細胞活性較對照組低（P＜0.05），以150mg/L作用24h最明顯。3、30～60mg/LGA組、15～35mg/L槲皮素組、30～75mg/L山奈酚組、30～75mg/L異鼠李素組預處理內皮細胞后細胞

6、活性均較150mg/L ox-LDL損傷組高(P<0.05)，對ox-LDL所致的內皮細胞損傷有修復作用，且60mg/LGA組、35mg/L槲皮素組、75mg/L山奈酚組、75mg/L異鼠李素組對損傷后內皮細胞的修復作用最為明顯。4、與對照組比較，150mg/L ox-LDL組明顯增加HAECs內ICAM-1、VCAM-1、MCP-1分泌，促進NF-κB的激活（P<0.05）；30～60mg/L GA和1mmol/L ASP均顯著抑制1

7、50mg/L ox-LDL誘導的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1分泌，降低NF-κB的激活（P<0.05），其中60mg/LGA與1mmol/L ASP抑制作用最為明顯（P<0.05），但兩者之間的抑制作用無差異（P>0.05）。
　　結論：1、30～90mg/LGA可促進ox-LDL損傷后內皮細胞的修復，且以60mg/LGA的修復作用最為顯著；2、30～60mg/LGA可有效抑制ox-LDL誘導HAECs炎癥因子ICAM-