2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:探討桿狀病毒作為載體鈉碘轉(zhuǎn)運(yùn)體(NIS)基因作為報(bào)告基因監(jiān)測(cè)干細(xì)胞的可行性。
   方法:通過Bac-to-Bac方法重組GFP及NIS桿狀病毒(Bac–GFP 及Bac–NIS),以不同感染復(fù)數(shù)(MOI)的重組綠色熒光蛋白(GFP)基因桿狀病毒(Bac-GFP)分別感染誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell,iPS)、人類胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cel

2、ls, hESC)及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs), 分別通過熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀測(cè)定干細(xì)胞的感染效率及熒光表達(dá)強(qiáng)度、熒光顯微鏡觀察干細(xì)胞的熒光表達(dá)時(shí)間以及臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)重組桿狀病毒對(duì)干細(xì)胞的毒性。通過重組NIS基因桿狀病毒(Bac-NIS)感染BMSCs,觀察不同MOI的Bac-NIS對(duì)干細(xì)胞攝125I的影響;Bac-NIS感染的干細(xì)胞不同時(shí)間攝125I和攝9

3、9mTcO4-功能的動(dòng)態(tài)測(cè)定以及感染干細(xì)胞攝125I的高氯酸鈉抑制實(shí)驗(yàn);同時(shí)還進(jìn)行了Bac–NIS感染的干細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞攝碘的相關(guān)性研究。
   結(jié)果:成功制備了重組NIS和GFP基因的桿狀病毒,受CMV(巨細(xì)胞病毒)立早期基因啟動(dòng)子調(diào)控。重組GFP桿狀病毒MOI為200時(shí),通過熒光顯微鏡觀察iPS、hESC的感染效率大約為12%、27%;BMSCs的感染效率和熒光強(qiáng)度隨Bac-GFP MOI的增加而增加,當(dāng)MOI為200時(shí),細(xì)

4、胞感染效率和熒光強(qiáng)度達(dá)最高,感染效率為84.2%,而MOI為100時(shí)細(xì)胞的感染效率即達(dá)78%;當(dāng)MOI為400時(shí),細(xì)胞死亡數(shù)與對(duì)照組7天內(nèi)未見明顯差異;感染的BMSCs的熒光表達(dá)隨著時(shí)間逐漸降低,第5d可見74.6%的細(xì)胞表達(dá),第12d仍有34.2%的細(xì)胞表達(dá)。
   Bac-NIS感染的BMSCs放射性125I攝取隨著MOI的增加而增加,MOI=200時(shí),細(xì)胞攝碘達(dá)最高;而且細(xì)胞攝取的碘可隨高氯酸鈉濃度的增加而明顯抑制;細(xì)胞動(dòng)

5、態(tài)攝碘實(shí)驗(yàn)顯示,感染細(xì)胞的125I攝取隨著時(shí)間逐漸增加,30min達(dá)高峰,隨后逐漸排出;而感染細(xì)胞攝取的放射性高锝酸根(99mTcO4-)同樣隨著時(shí)間逐漸增加,30min達(dá)高峰,但高峰時(shí)間較125I維持相對(duì)較長(zhǎng),為15-45min,且排出也相對(duì)較慢。
   Bac-NIS感染的BMSCs數(shù)量與細(xì)胞放射性計(jì)數(shù)之間呈顯著的相關(guān)性,R2=0.99,表明通過放射性計(jì)數(shù)變化可間接表明BMSCs的數(shù)量,為活體內(nèi)示蹤和定量干細(xì)胞提供依據(jù)。

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