通腑泄?jié)岱剿帉Υ笫蠹毙苑螕p傷的影響及其機理研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過檢測脂多糖(LPS)介導的急性肺損傷(ALI)大鼠模型血液及肺組織中白介素-6(IL-6)、白介素-13(IL-13)、內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)及血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換酶(ACE)等指標的變化，研究大鼠ALI時的炎癥反應特點，并以通腑泄?jié)嶂兴庍M行干預，同時以銀杏葉提取物(GBE)作為對照，觀察通腑泄?jié)岱剿帉PS誘導大鼠ALI的保護作用，并探討其作用機理，為臨床治療提供實驗依據(jù)。 方法：將50只雄性SD

2、大鼠置于實驗環(huán)境中適應性喂養(yǎng)1周，隨機取出10只，作為正常對照組(normalgroup)，其余40只大鼠隨機分為脂多糖組(LPSgroup)、中藥高劑量+LPS組(簡稱“高劑量組”，high-dosegroup)、中藥低劑量+LPS組(簡稱“低劑量組”，low-dosegroup)、GBE+LPS組(簡稱“GBE組”，GBEgroup)，每組10只。 從第2周開始用藥干預，高劑量組用通腑泄?jié)嶂兴幑辔福瑒┝繛?2g生藥/kg(相

3、當于臨床成人用藥量的14倍)；低劑量組用通腑泄?jié)嶂兴幑辔?，劑量?g生藥/kg(相當于臨床成人用藥量的7倍)；GBE組用GBE灌胃，按所含黃酮甙計算，8mg/kg。容量均為1ml/mg，每日1次。正常對照組與LPS組均給予等容量蒸餾水。連續(xù)3天。末次用藥3小時后，GBE組再給一次GBE，劑量同前。再過2小時，高、低劑量組、LPS組及GBE組均予尾靜脈注射LPS5mg/kg，復制大鼠急性ALI模型。正常組靜脈注射等量生理鹽水。 各

4、組在給LPS或生理鹽水2h后斷頭取血，立即分離血漿，并取血清，-20℃凍存待檢。取右肺組織，制成10％的肺組織勻漿。4℃6000r/min離心5min，提取上清液，-20℃凍存待檢。取左側(cè)肺臟中部組織0.5cm×0.5cm，用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，光學顯微鏡下觀察支氣管與肺組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 1通腑泄?jié)岱剿帉LI模型大鼠一般狀況的影響 中藥高、低劑量組在灌服通腑泄?jié)岱剿幒蟮诙?部分在第

5、一天)出現(xiàn)排便次數(shù)及排便量的增多，部分大鼠肛門可見稀便粘附，高劑量組尤其明顯。正常對照組、LPS組及GBE組排便情況無明顯變化。各組大鼠進食量、飲水及活動情況未見明顯異常反應。 注射LPS后，大鼠呼吸頻率增快或呼吸困難，呼吸幅度加大，部分表現(xiàn)為呼吸窘迫，以LPS組最為明顯。高、低劑量組及GBE組以上癥狀較輕。 各組均無實驗大鼠死亡。 2通腑泄?jié)岱剿帉δＰ痛笫蠓谓M織病理形態(tài)的影響 2.1肺臟大體形態(tài)觀察

6、 正常對照組各只大鼠肺外觀無明顯異常改變，雙肺呈粉紅色，體積適中，彈性度好，表面光潔。LPS組肺組織明顯腫脹，體積增大，重量增加，色澤暗紅，包膜下點片狀出血，切面疏松，有黃色或淡紅色液體溢出。高、低劑量組及GBE組大鼠肺組織水腫及表面出血點明顯少于LPS組。 2.2HE染色下光鏡觀察 正常對照組：肺組織結(jié)構(gòu)清晰可見，支氣管走行正常，肺泡壁厚薄均勻，肺泡壁中的毛細血管豐富，肺泡腔內(nèi)無炎細胞浸潤，偶見少數(shù)肺泡巨噬細胞，細

7、小支氣管管壁完整，無滲出、水腫等病變。 LPS組：肺組織結(jié)構(gòu)尚清，肺間質(zhì)及肺泡中有較多的中性粒細胞及紅細胞，肺泡間隔增厚。肺泡充氣欠佳，肺泡腔大小不等，結(jié)構(gòu)完整性破壞，肺泡腔內(nèi)漏有紅細胞及漿液纖維素性滲出物，肺泡間隙有大量中性白細胞浸潤，支氣管壁呈炎性灶狀細胞浸潤，并可見毛細血管擴張充血，小動脈管腔狹窄、平滑肌明顯水腫。 高、低劑量及GBE組：病理改變與模型組相似，但水腫和炎性細胞滲出和浸潤程度明顯輕于LPS組。

8、 3通腑泄?jié)岱剿帉Υ笫笱杭胺谓M織中IL-6、IL-13、ET-1、NO和ACE含量的影響 3.1各組大鼠血清及肺組織中的IL-6含量 結(jié)果顯示，LPS組大鼠血清及肺組織中IL-6含量(0.14±0.03，0.15±0.02)較正常對照組(0.05±0.01，0.06±0.01)明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預，治療各組血清及肺組織中IL-6含量與LPS組相比均有明顯降低(P＜0.01)；高劑量組血清及肺組織中IL-

9、6含量(0.08±0.01，0.10±0.02)均低于低劑量組(0.11±0.02，0.12±0.01)與GBE組(0.11±0.01，0.12±0.02)(P＜0.01或P＜0.05)；而低劑量組與GBE組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 3.2各組大鼠血清及肺組織中的IL-13含量 結(jié)果顯示，LPS組大鼠血清及肺組織中IL-13含量(1.34±0.18，1.41±0.19)較正常對照組(1.87±0.13，1.83

10、±0.13)明顯降低(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預，治療各組血清及肺組織中的IL-13含量與LPS組相比有明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)；高劑量組血清及肺組織中IL-13含量(1.72±0.08，1.68±0.10)均高于低劑量組(1.56±0.07，1.52±0.08)與GBE組(1.57±0.07，1.54±0.10)(P＜0.01或P＜0.05)；而低劑量組與GBE組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 3.3各組大鼠

11、血漿及肺組織中ET-1的含量 結(jié)果顯示，LPS組(155.60±13.72，13.35±1.08)較正常對照組(102.15±10.05，8.20±0.81)明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預，高劑量組血漿及肺組織中ET-1含量(138.90±10.35，11.00±1.65)與LPS組相比，有明顯降低(P＜0.01)；低劑量組、GBE組血漿中ET-1的含量與LPS組相比均有明顯降低(P＜0.05)，但兩者肺組織中ET-1的含

12、量(12.94±1.33，12.93±1.12)與LPS組相比無顯著性差異(P＞0.05)；三個治療組之間血漿中ET-1含量無顯著性差異(P＞0.05)，肺組織中ET-1含量高劑量組明顯低于低劑量組和GBE組(P＜0.01)。 3.4各組大鼠血清及肺組織中NO的含量 LPS組血清及肺組織中NO含量(44.48±4.26，0.336±0.031)較正常對照組(32.02±2.71，0.228±0.022)明顯升高(P＜0.

13、01)。經(jīng)用藥干預，高劑量組血清及肺組織中的NO含量(39.76±3.08，0.291±0.042)較LPS組明顯降低(P＜0.01)，低劑量組(41.66±3.51，0.311±0.023)、GBE組(45.74±4.24，0.336±0.023)與LPS組相比均無明顯差異(P＞0.05)。高、低劑量組血清中NO含量與GBE組相比，有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01)。肺組織中NO含量高、低劑量組之間無明顯差異(P＞0.05)，高

14、劑量組較GBE組明顯降低(P＜0.01)，低劑量組與GBE組相比無顯著性差異(P＞0.05)。 3.5各組大鼠血清及肺組織中ACE的含量 結(jié)果表明，血清中ACE的含量，LPS組(11.78±2.01)明顯低于對照組(19.87±3.11)(P＜0.01)，三個治療組與LPS組比較有明顯差異(P＜0.01)，高劑量組(17.91±2.70)與GBE(15.32±2.08)組比較有明顯差異(P＜0.05)，低劑量組及GBE組

15、兩者之間無明顯差異(P＞0.05)；肺組織中ACE的含量，LPS(4.90±0.54)組較對照組(3.29±0.44)明顯升高(P＜0.01)，三個治療組與LPS組比較有明顯差異(P＜0.01)，三治療組之間無明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論： 1ALI時，血液及肺組織中ET-1、NO、IL-6水平升高，IL-13水平下降，表明炎癥反應是ALI發(fā)病中的重要機制。 2ALI時，血清中ACE水平下降，肺組織中ACE水