高效液相色譜與共振瑞利散射聯用技術在藥物分析中的研究與應用.pdf

1、共振瑞利散射技術（Resonance Rayleigh scattering，RRS）因其靈敏度高、選擇性好、操作簡便等顯著特點而廣泛應用于核酸、蛋白質等生物大分子及痕量元素的測定中。目前，RRS與流動注射分析及毛細管電泳聯用方法的成功建立，充分發(fā)揮了RRS高靈敏度及高選擇性-的優(yōu)點，同時避免了其重現性及穩(wěn)定性較差的不足。
　　 高效液相色譜法（High performance liquid chromatography，HPL

2、C）是目前藥物分析中最常用的檢測方法，但HPLC與RRS聯用（HPLC-RRS）的方法鮮見報道。RRS技術作為一種新型的HPLC檢測方法，其突出優(yōu)點是色譜信號的產生不依賴于被測物本身的化學特性，尤其適用于無紫外特征吸收及非熒光物質的檢測。本文建立了HPLC-RRS聯用的一般研究思路及實驗方法，同時以氨基糖苷類藥物及米托蒽醌的含量測定為例明確實驗中各影響因素。此方法將HPLC自動分離分析功能與RRS技術方法簡便及靈敏度高的優(yōu)點相結合，進一

3、步拓寬了RRS技術的應用范圍，并為HPLC提供了一種全新的檢測模式。本文的主要研究內容包括以下三個方面：
　　 1、高效液相色譜與共振瑞利散射聯用測定不同制劑中阿米卡星的含量。以滂胺天藍為探針，以共振瑞利散射法測定阿米卡星含量為基礎，建立聯用方法。采用Agilent Zorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μm）及保護柱（Security Guard C18，4×2mm，Pherlomene

4、x），流動相為乙腈：水=7：93（v/v），流速0.50mL·min-1，λex=λem=362nm。探針為2.5×10-4mol·L-1的PSB溶液，pH為3.0，單泵的流速為0.05mL·min-1，反應管長150cm，內徑0.5mm。阿米卡星的線性范圍均為1.0μg·mL-1～15.0μg·mL-1（R2=0.9993）；最低檢測限為0.5μg·mL-1；提取回收率為96.5％～101.0％；日內精密度小于2.44％，日間精密度小

5、于4.58％。該方法簡便、快速、靈敏度高、選擇性好并成功用于不同制劑中AMK含量的測定中。
　　 2、高效液相色譜與共振瑞利散射聯用同時測定三種氨基糖苷類抗生素的含量。以共振瑞利散射法測定妥布霉素、依替米星及奈替米星的含量為基礎，建立聯用方法。采用Agilent Zorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μm）及保護柱（Security Guard C18，4×2mm，Phenomenex），

6、流動相為甲醇：水（含0.2％TFA）=5：95（v/v），流速0.50mL·min-1，λex=λem=362nm。探針為2.0×10-5mol·L-1的PSB溶液，pH為9.5，單泵的流速為0.2mL·min-1，反應管長250cm，內徑0.5mm。三種氨基糖苷類抗生素的線性范圍均為2.0μg·mL-1～20.0μg·mL-1，最低檢測限均為1.0μg·mL-1；提取回收率≥97.7％；日內精密度在1.47％～2.68％之間；日間精密

7、度在3.45％～5.26％之間。上述HPLC-RRS方法己成功用于妥布霉素滴眼液、硫酸依替米星針劑及硫酸奈替米星針劑及混合樣品中氨基糖苷類藥物的含量測定中。
　　 3、高效液相色譜與共振瑞利散射聯用測定健康人血漿及尿液中米托蒽醌的含量?；诿淄休祯c鉬酸銨的共振瑞利散反應，建立高效液相色譜與共振瑞利散射聯用測定米托蒽醌的新方法。色譜柱為AgilentZorbox SB-C18 column（250mm×4.6mm i.d.，5μ

8、m）及保護柱（SecurityGuard C18.4×2mm，Phenomenex）。流動相為乙腈：水=22：78（v/v），HPLC流速為0.50mL·min-1，λex=λem=365nm，紫外檢測波長為242nm。以鉬酸銨溶液為探針，濃度為1.0×10-3mol·L-1，單泵的流速為0.2mL·min-1，反應管長150cm，內徑0.5mm。該方法簡便、快速、靈敏度高、流動相體系簡單，采用等度洗脫，對儀器要求不高，已成功應用于健康