胰島素抵抗大鼠存活時間與Klotho表達關系的研究.pdf

1、目的:
　　 通過鏈脲佐菌素(STZ)誘導當日出生的Wistar大鼠建立胰島素抵抗(IR)模型,探討胰島素抵抗大鼠Klotho的表達變化與存活時間的關系以及川芎嗪(TMP)與氨基胍(AG)治療的干預作用。
　　 方法:
　　 1.實驗動物及分組:出生當日Wistar大鼠,腹腔注射STZ(90mg/kg)復制IR模型(a model of noninsulin-dependent diabetes induced

2、by neonatal streptozotocin,n0-STZ)。正常伺養(yǎng)至8周齡,空腹血糖≥7.0mmnol/L或糖耐量試驗餐后1小時血糖≥11.1mmol/L者選入本研究。設立正常對照組(CN組)、胰島素抵抗組(IR組)及川芎嗪+氨基胍(TMP+AG組)治療組。記錄各組大鼠存活時間。
　　 2.空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)和糖化血清蛋白(GSP)檢測:分別于造模第8周、24周和32周斷尾取空腹血,檢測FPG

3、,留取血清檢測FINS和GSP,根據(jù)公式(FPG·FINS)/22.5計算胰島素抵抗指數(shù)(IRI)。采用果糖胺法檢測各組GSP含量。
　　 3.生化指標檢測:于造模32周,摘眼球取血,離心留取血清,全自動生化分析儀測定血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)。留取肝、腎、腦等標本。
　　 4.實時定量RT-PCR:分別檢測腎組織晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)、IGF-1R和klotho

4、 mRNA,腦組織IGF-1R和klotho mRNA,肝組織IGF-1R mRNA的表達水平。
　　 5.Western Blot:檢測腎和腦組織Klotho蛋白、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)及IGF-1R表達,肝組織晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE)及IGF-1R的表達
　　 6.免疫組織化學染色:觀察腎組織klotho蛋白、磷酸化的胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)蛋白表達。
　　 結果:

5、　　 1.各組動物32周齡存活率:IR組為35％(7/20),TMP+AG組85％(17/20),CN組為100％(20/20)。IR組存活率明顯低于CN組(P＜0.05),TMP+AG組存活率均明顯高于IR組(P＜0.05)。
　　 2.FPG、FINS和GSP檢測結果:8周齡時,模型組FPG、FINS、IRI和GSP含量均高于CN組(JP＜0.05)。用藥8周(16周齡)時,TMP+AG組FPG、FINS、IRI和GSP均

6、低于IR組(P＜0.05),高于CN組(P＜0.05);用藥24周(32周齡),TMP+AG組FPG和FINS較IR組進一步降低(P＜0.05),FINS和IRI仍高于CN組;TMP+AG組與CN組間GSP差異無統(tǒng)計學意義。
　　 3.生化指標檢測結果:各組血清TG、TC和Cr差異無統(tǒng)計學意義,TMP+AG組的BUN較IR組明顯下降(P＜0.05)。
　　 4.實時定量RT-PCR結果:
　　 (1)腎組織RAG

7、E mRNA表達:IR組顯著高于CN組(P＜0.05)。TMP+AG組明顯低于IR組(P＜0.05),與CN組差異無統(tǒng)計學意義。
　　 (2)IGF-1R mRNA表達:IR組腦、肝、外周血淋巴細胞較CN組明顯降低(P＜0.05)。TMP+AG組腦、肝組織較IR組明顯升高(P＜0.05),外周血淋巴細胞較IR組降低(P＜0.05);CN組、IR組和TMP+AG組間腎組織表達均無明顯差異。
　　 (3)Klotho mRN

8、A表達:IR組腎、腦、外周血淋巴細胞較CN組明顯降低(P＜0.05)。TMP+AG組腎、腦組織較IR組明顯升高(P＜0.05),與CN組比較無統(tǒng)計學差異。TMP+AG組外周血淋巴細胞與IR組差異無統(tǒng)計學意義。
　　 5.Western Blot結果:
　　 (1)腎組織RAGE蛋白表達:IR組顯著高于CN組(P＜0.05)。TMP+AG組明顯低于IR組(P＜0.05),與CN組差異無統(tǒng)計學意義
　　 (2)IGF

9、-1R蛋白表達:IR組腦、肝、腎較CN組明顯降低(P＜0.05)。TMP+AG組腦、肝、腎組織較IR組明顯升高(P＜0.05)。
　　 (3)Klotho蛋白表達:IR組腎組織表達較CN組明顯降低(P＜0.05);TMP+AG組較IR組明顯升高(P＜0.05),與CN組比較無統(tǒng)計學差異。腦組織未檢測到該蛋白表達。
　　 6.免疫組化結果:
　　 (1)Klotho蛋白表達:IR組腎組織Klotho蛋白表達(陽性細

10、胞胞漿被染成棕黃色,見圖3)較CN組明顯降低(P＜0.05),TMP+AG組較IR組表達明顯增加(P＜0.05),和CN組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),
　　 (2)IGF-1R蛋白表達:IR組腎臟遠曲小管和集合小管IGF-1R蛋白表達較CN組減少(P＜0.05);TMP+AG組較IR組增加,與cN組間差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　 1.STZ可以誘導出生當日Wistar大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗。該胰島

11、素抵抗大鼠FPG、FINS、IRI和GSP隨時間延長而升高,其存活時間明顯縮短。
　　 2.該IR大鼠腎組織Klotho mRNA和蛋白表達下調(diào),RAGE mRNA和蛋白表達上調(diào);應用TMP+AG治療可使大鼠腎組織KlothomRNA和蛋白表達上調(diào),RAGE mRNA和蛋白表達下調(diào),并使大鼠存活時間明顯延長。
　　 3.TMP+AG延長IR大鼠存活時間作用與調(diào)控IR大鼠多器官組織的Ins/IGF-1信號系統(tǒng)功能的平衡有關