大黃湯劑蒽醌類(lèi)成分測(cè)定及其在顱腦損傷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：采用超高效液相色譜方法對(duì)大黃湯劑蒽醌類(lèi)成分番瀉苷B、番瀉苷A、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚進(jìn)行同步定性、定量測(cè)定；并檢測(cè)創(chuàng)傷性顱腦損傷患者鼻飼大黃湯劑后腦脊液中的蒽醌類(lèi)可吸收成分，為大黃抗顱腦損傷質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的確定奠定基礎(chǔ)；再以該蒽醌類(lèi)可吸收成分作為干預(yù)因素，探討其對(duì)創(chuàng)傷性顱腦損傷模型大鼠腦皮質(zhì)超氧化物歧化酶活力（superoxidase dismutase，SOD）的影響，以探索大黃對(duì)顱腦外傷的腦保護(hù)作用。

2、r>　　 方法：
　　 （1）采用超高效液相色譜方法，色譜柱為UPLC BEH C18色譜柱（2.1×50mm，1.7μm），以甲醇-0.5％乙酸為流動(dòng)相，流量為0.5ml/min，探測(cè)波長(zhǎng)為254納米，對(duì)大黃湯劑番瀉苷B、番瀉苷A、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等7種蒽醌類(lèi)成分同步進(jìn)行測(cè)定；
　　 （2）選擇符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的創(chuàng)傷性顱腦損傷患者，于鼻飼大黃湯劑4小時(shí)后行腰椎穿刺術(shù)，收集患者腦脊液，采用上述

3、超高效液相色譜方法檢測(cè)創(chuàng)傷性顱腦損傷病人腦脊液中蒽醌類(lèi)成分。
　　 （3）將創(chuàng)傷性顱腦損傷病人腦脊液中所檢測(cè)出的蒽醌類(lèi)有效成分進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，用30只Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組和治療組（每組10只），治療組及模型組復(fù)制創(chuàng)傷性顱腦損傷SD大鼠模型，假手術(shù)組SD大鼠予開(kāi)骨窗，不打擊。治療組給予大黃素甲醚（40mg/kg）灌胃，假手術(shù)組及模型組給予等量生理鹽水灌胃，于灌胃24小時(shí)后處死，取得腦皮質(zhì)，采用羥胺

4、法檢測(cè)大鼠腦皮質(zhì)SOD活力。
　　 結(jié)果：
　　 （1）大黃湯劑中蒽醌類(lèi)成分分別為：番瀉苷B線(xiàn)性范圍為0.255～16.304μg/ml（r=0.9994），平均回收率為97.57％（RSD=3.12％）；番瀉苷A線(xiàn)性范圍為0.177～11.286μg/ml（r=0.9995），平均回收率為98.04％（RSD=2.84％）；蘆薈大黃素線(xiàn)性范圍為0.198～12.666μg/ml（r=0.9986），平均回收率為99.6

5、6％（RSD=1.15％）；大黃酸線(xiàn)性范圍為0.210～26.858μg/ml（r=0.9997），平均回收率為100.12％（RSD=2.17％）；大黃素線(xiàn)性范圍為0.285～36.428μg/ml（r=0.9984），平均回收率為102.24％（RSD=1.25％）；大黃酚線(xiàn)性范圍為0.386～24.642μg/ml（r=0.9996），平均回收率為98.86％（RSD=2.68％）；大黃素甲醚線(xiàn)性范圍為0.268～17.142μg

6、/ml（r=0.9964），平均回收率為97.89％（RSD=2.46％）。其中大黃酸質(zhì)量濃度（20.223±0.708μg/ml）最大，大黃酚質(zhì)量濃度（3.101±0.167μg/ml）最低，各成分定量結(jié)果均在線(xiàn)性范圍之內(nèi)。
　　 （2）創(chuàng)傷性顱腦損傷病人鼻飼大黃湯劑后腦脊液中檢測(cè)出大黃有效蒽醌類(lèi)成分為大黃素甲醚。
　　 （3）該有效成分進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，SD大鼠腦皮質(zhì)SOD活力在假手術(shù)組（19.918±1.067U/

7、mgprot）較模型組（18.757±1.821U/mgprot）顯著增高（p＜0.05），治療組（22.083±2.578U/mgprot）較假手術(shù)組顯著增高（p＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 （1）超高效液相色譜方法同步測(cè)定大黃湯劑7種蒽醌類(lèi)成分，該方法學(xué)具有快速、簡(jiǎn)單、靈敏、精確和有效的特點(diǎn)。
　　 （2）發(fā)現(xiàn)大黃湯劑有效成分-大黃素甲醚為創(chuàng)傷性顱腦損傷患者腦脊液中可吸收的有效生物成分，該成分可能為大黃