基于Ii分子的HCV-NS3 Th1表位基因疫苗對(duì)樹突細(xì)胞抗原提呈功能的影響.pdf

1、丙型病毒性肝炎是嚴(yán)重危害人類健康的傳染病。全球丙肝病毒(HCV)的感染人數(shù)約為一億七千萬，占世界人口總數(shù)的1-3％。在感染的人群中，約80％轉(zhuǎn)為慢性，20％發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌；我國(guó)的HCV感染者占人口總數(shù)的3.2％，估計(jì)感染者總數(shù)約為4000萬。 自從1989年HCV cDNA首次被克隆成功至今，對(duì)HCV的分子生物學(xué)研究取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。目前已明確，HCV為單股正鏈RNA病毒，屬黃病毒科，全長(zhǎng)約9600個(gè)核苷酸，ORF區(qū)

2、編碼3010個(gè)氨基酸的多聚蛋白前體，經(jīng)過宿主和病毒本身基因編碼的蛋白酶裂解為十個(gè)功能性片段，其中四個(gè)為結(jié)構(gòu)蛋白，分別是核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2以及P7；六個(gè)為非結(jié)構(gòu)蛋白，分別是NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B。盡管HCV的基本結(jié)構(gòu)已經(jīng)清楚，但是HCV的防治仍然是世界性的難題，α干擾素和病毒唑聯(lián)合治療是唯一的治療方法，但這種治療方法只對(duì)不到50％的患者顯效，且具有費(fèi)用高、易復(fù)發(fā)和副作用多等缺陷；尤其是我國(guó)流行的

3、HCV-Ⅱ/1b型，對(duì)α干擾素的治療應(yīng)答最低，因此發(fā)展治療和預(yù)防性丙肝疫苗，對(duì)于預(yù)防HCV感染和控制感染者的病情發(fā)展，都具有重要的意義。 HCV NS3蛋白具有絲氨酸蛋白酶和解旋酶活性，參與病毒蛋白翻譯后加工，為病毒復(fù)制所必須，針對(duì)NS3蛋白的T細(xì)胞應(yīng)答與自限性感染關(guān)系密切。目前公認(rèn)位于NS3區(qū)的1248-1261位氨基酸殘基為CD4<'+>Th1細(xì)胞表位，而且該表位對(duì)于MHC限制性具有廣譜特異性。在此之前的研究已經(jīng)以BALB/

4、c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，以MHC Ⅱ抗原提呈通路中的分子伴侶恒定鏈(invariant chain，Ii)為載體，用HCV-NS3的1248-1261表位替換Ii鏈的CLIP編碼片段構(gòu)建了內(nèi)源性靶向基因疫苗，并在細(xì)胞水平研究了所構(gòu)建的基因疫苗與抗原提呈分子之間的相互作用，用所構(gòu)建的疫苗對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行了免疫治療并取得了好的效果。本研究構(gòu)建了內(nèi)源性靶向基因疫苗的體外轉(zhuǎn)錄載體，在體外轉(zhuǎn)錄成mRNA，同時(shí)用小鼠的骨髓細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，成功的培養(yǎng)出

5、小鼠骨髓來源的樹突細(xì)胞，通過電轉(zhuǎn)的方法將內(nèi)源性靶向基因疫苗mRNA導(dǎo)入小鼠樹突細(xì)胞(dendritic cell，DC)內(nèi)，研究?jī)?nèi)源性靶向基因疫苗對(duì)DC表面分子的表達(dá)及細(xì)胞因子的分泌的影響。并用混合淋巴細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來研究?jī)?nèi)源性靶向基因疫苗是否影響DC對(duì)T細(xì)胞誘導(dǎo)分化功能。研究結(jié)果如下： 1．內(nèi)源性基因疫苗可有效地刺激樹突細(xì)胞成熟，增加表面協(xié)同刺激分子CD80、CD86、I-A<'d>的表達(dá)。 2．內(nèi)源性基因疫苗可有效地誘導(dǎo)D

6、C分泌細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ。 3．經(jīng)內(nèi)源性基因疫苗負(fù)載的DC可有效的刺激CD4<'+>T細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其向Th1方向分化。 綜上所述，用以Ii鏈作為載體針對(duì)HCV-NS3的Th1表位內(nèi)源性靶向基因疫苗修飾DC后，可增強(qiáng)DC的抗原提呈功能，能有效地激活CD4<'+>T細(xì)胞。這種方法有望為HCV的防治提供一種可行的途徑，為下一步構(gòu)建靶向樹突細(xì)胞的內(nèi)源性基因疫苗奠定基礎(chǔ)，在治療性HCV基因疫苗的開發(fā)研究中具有良好的