小鼠晶狀體干細(xì)胞的初步研究.pdf

1、背景:
　　干細(xì)胞是一類具有自我更新和多向分化能力的細(xì)胞,可以重建具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的組織或器官。在多種組織和器官內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)存在相應(yīng)的干細(xì)胞,如造血干細(xì)胞,骨髓干細(xì)胞等。在眼部組織中也發(fā)現(xiàn)多種干細(xì)胞,如角膜緣干細(xì)胞,視網(wǎng)膜干細(xì)胞等。已有的研究顯示在晶狀體內(nèi)可能存在干細(xì)胞,但對(duì)其在晶狀體上的分布位置和特性的研究尚無(wú)明確的結(jié)論。本研究依據(jù)干細(xì)胞具有代謝緩慢和表達(dá)特異標(biāo)記物的特點(diǎn),標(biāo)記有干細(xì)胞特性的細(xì)胞,確定其在晶狀體中的位置,根據(jù)

2、損傷刺激干細(xì)胞增殖的特性,觀察在晶狀體前囊膜損傷后晶狀體上皮細(xì)胞的增殖變化情況,進(jìn)一步明確晶狀體中干細(xì)胞的存在及分布規(guī)律。
　　目的:
　　明確小鼠晶狀體上皮細(xì)胞中慢周期細(xì)胞和有干細(xì)胞標(biāo)志蛋白細(xì)胞的分布特點(diǎn),觀察在損傷刺激下晶狀體上皮細(xì)胞的增殖變化規(guī)律。
　　方法:
　　60只3周齡Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為BrdU標(biāo)記組30只(30只眼)和生理鹽水對(duì)照組30只(30只眼)。BrdU標(biāo)記組按150mg

3、/kg體重的劑量每天兩次腹腔注射BrdU,連續(xù)注射10d,在BrdU標(biāo)記完成后的第0、1、2、3、4、6、8、10、12和14周取小鼠晶狀體,制備冰凍切片,用免疫熒光染色法進(jìn)行BrdU和胚胎干細(xì)胞標(biāo)志蛋白SOX2的免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下觀察BrdU標(biāo)記細(xì)胞的量和分布變化,SOX2陽(yáng)性細(xì)胞在晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá)和分布規(guī)律以及與BrdU標(biāo)記細(xì)胞的關(guān)系。對(duì)照組按15ml/kg體重注射生理鹽水,做平行對(duì)照處理。
　　另取3周齡Ba

4、lb/c小鼠(12只)分為4組,構(gòu)建晶狀體前囊膜損傷模型。右眼做損傷模型為實(shí)驗(yàn)眼,左眼不做處理為對(duì)照眼。各組小鼠(n=3)分別在損傷后0h、12h、24h和36h,按150mg/kg體重一次腹腔注射BrdU,在注射后1h摘取眼球,取出晶狀體并制備晶狀體囊膜鋪片,用免疫熒光法進(jìn)行BrdU免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　在完成BrdU標(biāo)記后(即0周),BrdU標(biāo)記組晶

5、狀體上皮中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)細(xì)胞BrdU標(biāo)記率均達(dá)100％。隨著小鼠的周齡增加,晶狀體上皮細(xì)胞的BrdU標(biāo)記率逐漸下降,觀察到12周時(shí),BrdU標(biāo)記率降至最低,在中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)分別為14.23%和5.86%(t=-20.123,P=0.000)。SOX2在晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定,陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于晶狀體上皮的中央?yún)^(qū),0周和14周時(shí)中央?yún)^(qū)上皮SOX2陽(yáng)性細(xì)胞率分別為3.74%和3.70%(t=0.027,P=0.979)。在BrdU標(biāo)記滯留細(xì)

6、胞中有一部分細(xì)胞同時(shí)表達(dá)SOX2,分布在晶狀體上皮的中央?yún)^(qū)。
　　在前囊膜未損傷組晶狀體上皮中央?yún)^(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在各時(shí)間點(diǎn)較為穩(wěn)定,前囊膜損傷組晶狀體上皮中央?yún)^(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目每個(gè)高倍視野在0h為44.9±10.9(vs.28.5±8.0),12h達(dá)到高峰為111.8±17.2(vs.26.4±6.0),到36h組降至27.5±9.7(vs.26.1±8.1)。兩組赤道區(qū)BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目穩(wěn)定,兩組各時(shí)間點(diǎn)之間均無(wú)顯著