柱前衍生化HPLC法測(cè)定齊墩果酸含量的研究.pdf

1、皂苷是一類重要的中藥活性成分，廣泛分布于植物界中，在抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、治療心血管疾病和糖尿病等方面都具有良好的應(yīng)用前景，是許多藥用植物如人參、黃芪、牛膝、遠(yuǎn)志的有效成分，故經(jīng)常作為指標(biāo)成分來(lái)評(píng)價(jià)中藥的質(zhì)量，但因皂苷類成分結(jié)構(gòu)特殊而且含量低，現(xiàn)有的測(cè)定方法很難滿足藥物質(zhì)量控制的要求，所以皂苷類成分的含量測(cè)定一直是中藥也是天然藥物分析的難題之一。
　　鑒于此，本課題采用柱前衍生化法對(duì)三萜類皂苷的代表—齊墩果酸的含量測(cè)定進(jìn)行了

2、研究，對(duì)衍生試劑、衍生反應(yīng)參數(shù)、衍生產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了系統(tǒng)深入的研究，在前期工作的基礎(chǔ)上成功建立了牛膝藥材中齊墩果酸的柱前衍生化測(cè)定法，并將其應(yīng)用到天麻膠囊中齊墩果酸的含量測(cè)定，取得滿意結(jié)果，為柱前衍生化用于皂苷類成分含量測(cè)定的后續(xù)研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　主要研究?jī)?nèi)容和方法如下:
　　1.對(duì)齊墩果酸(OA)單體進(jìn)行了衍生反應(yīng)研究，采用對(duì)硝基苯甲酰氯(PNC)為衍生試劑，系統(tǒng)研究了衍生反應(yīng)參數(shù)，確定了最優(yōu)反應(yīng)條件為:投料比:m

3、PNC∶mOA≥15∶1(mg∶mg)，2.5∶1≤吡啶∶酰氯≤20∶1(ml∶g);反應(yīng)方式:超聲波加速;反應(yīng)時(shí)間:超聲65min后靜置2h。在此條件下齊墩果酸可完全轉(zhuǎn)化為衍生產(chǎn)物。
　　2.用HPLC法對(duì)衍生反應(yīng)進(jìn)行了精確表征，采用柱層析和半制備液相色譜精制分離得到衍生產(chǎn)物純品，用紫外、紅外、核磁、質(zhì)譜對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，證明齊墩果酸的衍生產(chǎn)物為對(duì)硝基苯甲酸齊墩果酸酯，以面積歸一化法測(cè)定，純度達(dá)99.1％。
　　3.以分

4、離精制得到的衍生物為對(duì)照品，建立了牛膝中齊墩果酸的柱前衍生化測(cè)定法。牛膝藥材樣品經(jīng)脫脂、提取、水解后以所建立的衍生方法進(jìn)行衍生，確定酰氯用量為:m牛膝∶m酰氯=10∶1(g∶g)，測(cè)定色譜條件為:色譜柱:Diamonsil（鉆石）C18柱(200mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈-0.2％磷酸(95∶5)，流速1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):254nm，柱溫:室溫。結(jié)果齊墩果酸衍生物在2.0～6.0mg范圍內(nèi)線性良好，線性方程為y=85