RNA干擾聯(lián)合氧化苦參堿抑制VEGF治療子宮內(nèi)膜癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察RNA干擾聯(lián)合氧化苦參堿（Oxymatrine，Oxy）對(duì)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的基因表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響。 方法：針對(duì)VEGF基因RNA干擾的有效作用位點(diǎn)，利用pRNAT-CMV3.2-Neo載體，設(shè)計(jì)并構(gòu)建能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)siRNA的質(zhì)粒pRNAT-CMV3.2-Neo-VEGF，以及陰性對(duì)照表達(dá)質(zhì)粒pRN

2、AT-CMV3.2-Neo-neg；將構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株，并加入中藥Oxy，采用RT-PCR檢測(cè)VEGF mRNA表達(dá)的變化，Western印跡法檢測(cè)VEGF蛋白的表達(dá)，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期，顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，人工重組基底膜侵襲小室（Transwell）觀察細(xì)胞的侵襲能力。 結(jié)果：構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染Ishikawa細(xì)胞株，RNA干擾聯(lián)合Oxy可

3、下調(diào)細(xì)胞中VEGFmRNA及其蛋白的表達(dá)，明顯抑制Ishikawa細(xì)胞的增殖，細(xì)胞周期發(fā)生改變，G1期細(xì)胞比例增加，S期細(xì)胞則減少，熒光顯微鏡可見細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化，Ishikawa細(xì)胞侵襲基底膜的能力明顯被抑制。 結(jié)論：RNA干擾聯(lián)合Oxy可抑制Ishikawa細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)Ishikawa細(xì)胞凋亡及分化，降低腫瘤細(xì)胞的侵襲能力；其作用機(jī)制可能與成功下調(diào)VEGF基因的表達(dá)有關(guān)。RNA干擾聯(lián)合Oxy效果強(qiáng)于單用中藥治療或單用RN