星形膠質(zhì)細(xì)胞FEZ1對帕金森病神經(jīng)修復(fù)作用的研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是由于中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的進(jìn)行性缺失造成的以神經(jīng)退行性病變?yōu)橹鞯闹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)疾病。成束和延伸蛋白-1(fasciculation and elongation proteinzeta-1，F(xiàn)EZ1)參與哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及軸突成束與延伸，參與多巴胺能神經(jīng)元發(fā)生分化和多巴胺釋放調(diào)節(jié)。FEZ1主要在腦內(nèi)神經(jīng)元中表達(dá)，而在體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞中也有表達(dá)。有文獻(xiàn)報(bào)道，治療中樞

2、神經(jīng)系統(tǒng)疾病，可通過誘導(dǎo)人星形膠質(zhì)細(xì)胞FEZ1表達(dá)水平增高，從而對神經(jīng)細(xì)胞起到保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)研究FEZ1在PD大鼠模型中的表達(dá)情況及高表達(dá)FEZ1的2型星形膠質(zhì)細(xì)胞移植后PD癥狀改善情況，進(jìn)而探討星形膠質(zhì)細(xì)胞FEZ1在PD神經(jīng)修復(fù)中的作用。
　　目的：建立PD大鼠模型，研究FEZ1在多巴胺神經(jīng)元受損后的大鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化及定位情況，探討它在PD發(fā)病機(jī)制與神經(jīng)修復(fù)中的功能與意義。將2型星形膠質(zhì)細(xì)胞移植入PD大鼠紋狀體，觀察細(xì)胞的動(dòng)

3、態(tài)變化及其神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：采用立體定位注射6-OHDA于前腦內(nèi)側(cè)束的方法建立大鼠PD模型，應(yīng)用real-time PCR, Western blot檢測FEZ1在6-OHDA處理后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化，應(yīng)用免疫熒光化學(xué)法觀察FEZ1在大腦紋狀體和黑質(zhì)中的表達(dá)變化與細(xì)胞定位。應(yīng)用立體定位注射方法將CM-DiI標(biāo)記的2型星形膠質(zhì)細(xì)胞移植入PD大鼠紋狀體，檢測植入細(xì)胞的遷移情況，對神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)的修復(fù)及PD癥狀改善情況。

4、　　結(jié)果：(1)6-OHDA毀損后2周PD大鼠出現(xiàn)明顯的典型旋轉(zhuǎn)行為，Nissl染色及TH免疫熒光染色見 PD模型大鼠毀損側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元數(shù)量銳減。(2) real-time PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)EZ1的mRNA水平在6-OHDA處理后的大鼠紋狀體和黑質(zhì)中表達(dá)逐漸增加，達(dá)到最高峰，之后逐漸下降；Western blot結(jié)果顯示FEZ1蛋白水平變化與mRNA水平變化趨勢相似；GFAP蛋白表達(dá)變化與FEZ1蛋白表達(dá)變化也有相似的趨勢。(3)

5、免疫熒光化學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，正常大鼠中FEZ1主要表達(dá)在神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞中幾乎不表達(dá)，而毀損后FEZ1主要大量存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞中。(4)2型星形膠質(zhì)細(xì)胞移植入PD大鼠，細(xì)胞可以在植入部位存活，大鼠旋轉(zhuǎn)行為得到改善，植入的細(xì)胞遷移至黑質(zhì)和注射部位之外的紋狀體其它區(qū)域，黑質(zhì)中TH, FEZ1表達(dá)量增加。
　　結(jié)論：FEZ1在PD大鼠模型中的表達(dá)變化提示，F(xiàn)EZ1在帕金森病發(fā)生發(fā)展過程中可能起到調(diào)節(jié)多巴胺釋放、保護(hù)神經(jīng)元及延緩病情惡化的