孕酮調節(jié)帕金森病小鼠膠質細胞功能產生神經保護作用.pdf

1、目的：
　　 觀察皮下注射不同劑量的孕酮對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)損傷的帕金森病小鼠模型爬桿時間和中腦黑質酪氨酸羥化酶(TH)、神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)表達的影響,檢測紋狀體神經遞質多巴胺(DA)的含量和黑質腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的水平,探討孕酮是否可以調節(jié)膠質細胞功能對帕金森病產生抗炎神經保護作用及其機制。
　　 方法：
　　 雌性C57BL/6J小鼠80只,體重

2、18-25g。將經爬桿練習剔除不下桿、中途停頓不動和爬桿姿勢不良后的所有小鼠60只隨機分為5組:正常對照組(Nor),每日兩次皮下注射生理鹽水(0.01ml·g-1)共11d,第6d另外腹腔注射生理鹽水(0.01ml·g-1)4次；模型組(Mod),每日兩次皮下注射生理鹽水(0.01ml·g-1)共11d,第6d腹腔注射MPTP(15mg·kg-1,間隔2h,共注射4次):溶劑組(Veh),每日兩次皮下注射乙醇(10％,V/V)(0.0

3、1ml·g。)共11d,第6d腹腔注射MPTP(15mg·kg-1,間隔2h,共注射4次)；孕酮低劑量組(0.08mg·kg-1·d-1,Pro L),每日兩次皮下注射孕酮0.04mg·kg-1共11d,第6d腹腔注射MPTP(15mg·kg-1,間隔2h,共注射4次)；孕酮高劑量組(0.2mg·kg-1·d-1,Pro H),每日兩次皮下注射孕酮0.1mg·kg-1共11d,第6d腹腔注射MPTP(15mg·kg-1,間隔2h,共注射

4、4次)。并分別進行:①爬桿實驗(n=12):于給藥前1d、給MPTP后1d即第7d、給藥結束后1d即第12d測定動物從桿頂爬至桿底的時間；②免疫組織化學染色(n=6-8):在第12d急性處死動物,用免疫組織化學法觀察各組小鼠黑質TH和GFAP變化情況；③高效液相色譜-電化學檢測(high performance liquidchromatography-electrochemical detection,HPLC-ECD)(n=6):在

5、第12d急性處死動物,用HPLC-ECD法測定各組小鼠紋狀體內DA的含量；④ELISA檢測(n=3-4):標本同時取自進行HPLC-ECD檢測的小鼠,用ELISA檢測各組小鼠黑質TNF-α的水平。
　　 結果：
　　 1.一般行為改變:Nor組小鼠無明顯的改變,其余四組動物均出現(xiàn)漸進性的自發(fā)活動減少、肢體及軀干僵硬、步態(tài)不穩(wěn)、爬行緩慢、逃避反應遲緩等PD臨床表現(xiàn),飲食飲水明顯減少,個別小鼠還出現(xiàn)了類似人類的牙顫癥狀,24

6、h后基本恢復正常,同時還出現(xiàn)明顯的嗅探、覓食、對外界刺激敏感等改變。
　　 爬桿實驗:給藥前各組的爬桿時間無差別。給藥5d并造模后,與Nor組比較,Mod組、Veh組、Pro L組、Pro H組小鼠在爬桿時出現(xiàn)單肢或雙側肢體頻率快且恒定的刻板抖動,握持爬桿困難,這四組的爬桿時間都明顯延長(P<0.05)；Mod組與Veh組間無差別(P>0.05)；Pro L組和Pro H組與Mod組比較,差別都無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Pr

7、o L組與Pro H組之間無差別(P>0.05)。繼續(xù)給藥5d后,只有Mod組和Veh組的爬桿時間比Nor組延長有統(tǒng)計學意義(P<0.05):Mod組與Veh組間無差別(P>0.05)；Pro L組和Pro H組的爬桿時間都比Mod組有顯著的縮短(P<0.05)；Pro L組與Pro H組之間無差別(P>0.05)。
　　 2.黑質TH的表達:與Xor組相比,Mod組、Veh組、Pro L組、Pro H組小鼠黑質中的TH表達陽性

8、神經元數(shù)目顯著減少(P<0.05)；Mod組與Veh組間無差別(P>0.05)；只有Pro L組的TH陽性神經元數(shù)目比Mod組明顯增加(P<0.05)；Pro H組的TH陽性神經元數(shù)目比Mod組增多,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05),該組的TH陽性神經元數(shù)目明顯比Pro L組少(P<0.05)。
　　 3.黑質GFAP的表達:與Nor組相比,Mod組、Veh組、Pro L組、Pro H組小鼠黑質中的GFAP表達陽性神經元數(shù)目顯著增

9、多(P<0.05)；Mod組與Veh組間無差別(P>0.05)；Pro L組和Pro H組的GFAP陽性神經元數(shù)目都比Mod組明顯減少(P<0.05)；Pro H組的6FAP陽性神經元數(shù)目明顯比Pro L組多(P<0.05)。
　　 4.紋狀體DA含量的變化:與Nor組相比,Mod組、Veh組、Pro L組、ProH組小鼠紋狀體中的DA含量顯著減少(P<0.05)；Mod組與Veh組間無差別(P>0.05):Pro L組和Pro

10、 H組的DA含量都比Mod組明顯增加(P<0.05)；Pro H組的DA含量明顯比Pro L組少(P<0.05)。
　　 5.黑質TNF-α水平的改變:與Nor組相比,Mod組、Veh組、Pro L組、ProH組小鼠黑質的TNF-α水平顯著升高(P<0.05)；Mod組與Veh組間無差別(P>0.05):只有Pro L組的TNF-α水平比Mod組明顯降低(P<0.05)；Pro H組的TNF-α水平比Pro L組高,但無統(tǒng)計學意