混合細(xì)胞性肝癌的臨床病理特征、免疫學(xué)特征及起源的研究.pdf

1、第一部分:混合細(xì)胞性肝癌的臨床病理特征及預(yù)后研究
　　目的:
　　回顧性分析混合細(xì)胞性肝癌患者的臨床病理資料及隨訪資料，探討該類型原發(fā)性肝癌的臨床病理特征及預(yù)后情況。
　　方法:
　　收集2007年1月-2012年1月于中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院普外科和湖南省人民醫(yī)院肝膽外科行肝切除手術(shù)治療的38例混合細(xì)胞性肝癌患者的臨床病理資料及隨訪資料，并分別與同期于中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院普外科行肝切除手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者和膽管細(xì)胞癌

2、患者各40例的臨床病理資料及隨訪資料進(jìn)行對(duì)比分析。
　　結(jié)果:
　　(1)混合細(xì)胞性肝癌組與肝細(xì)胞癌組在血清CA19-9水平、肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及周?chē)K器、侵犯肝被膜以及腫瘤細(xì)胞病理分化程度5個(gè)方面存在顯著差異。
　?。?)混合細(xì)胞性肝癌組與膽管細(xì)胞癌組在性別、血清HBsAg陽(yáng)性率、血清AFP陽(yáng)性率、血清CA19-9水平、肝硬化、腫瘤大小、門(mén)靜脈癌栓、侵犯肝被膜及腫瘤細(xì)胞病理分化程度9個(gè)方面存在顯著差異。
　　(

3、3)混合細(xì)胞性肝癌組患者總的1、3、5年生存率分別是71.1％、36.8％、7.9％。肝細(xì)胞癌組患者總的1、3、5年生存率分別是87.5％、55.0％、15.0％。膽管細(xì)胞癌組患者總的1、3、5年生存率分別是57.5％、15.0％、0.0％?；旌霞?xì)胞性肝癌組與肝細(xì)胞癌組、膽管細(xì)胞癌組的1、3、5年總生存率均有顯著差異，介于肝細(xì)胞癌組與膽管細(xì)胞癌組之間。
　　(4)混合細(xì)胞性肝癌組的中位生存時(shí)間為25個(gè)月，肝細(xì)胞癌組的中位生存時(shí)間是

4、38個(gè)月，膽管細(xì)胞癌組的中位生存時(shí)間是14個(gè)月。
　　(5)單因素分析得出血清CA19-9、有無(wú)肝硬化、腫瘤大小、肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門(mén)靜脈癌栓、侵犯肝被膜、手術(shù)根治性切除率、病理分化程度是混合細(xì)胞性肝癌預(yù)后的相關(guān)因素;肝硬化、腫瘤大小、門(mén)靜脈癌栓、侵犯肝被膜、手術(shù)根治性切除率、病理分化程度是肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)因素;而腫瘤大小、肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及周?chē)K器、手術(shù)根治性切除率是膽管細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)因素。
　　(6)多因素分析顯示影

5、響混合細(xì)胞性肝癌預(yù)后的獨(dú)立因素為:肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門(mén)靜脈癌栓、手術(shù)根治性切除率;影響肝細(xì)胞癌預(yù)后的獨(dú)立因素為:肝硬化、門(mén)靜脈癌栓、手術(shù)根治性切除率;影響膽管細(xì)胞癌預(yù)后的獨(dú)立因素為:肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及周?chē)K器、手術(shù)根治性切除率。
　　結(jié)論:
　　1、混合細(xì)胞性肝癌的臨床病理特征介于肝細(xì)胞癌與膽管細(xì)胞癌之間，但更傾向于肝細(xì)胞癌的臨床特征，但其腫瘤侵襲力較肝細(xì)胞癌及膽管細(xì)胞癌強(qiáng)。
　　2、混合細(xì)胞性肝癌的預(yù)后亦介于肝細(xì)胞癌

6、與膽管細(xì)胞癌之間，明顯較肝細(xì)胞癌差，但卻較膽管細(xì)胞癌好。
　　3、影響混合細(xì)胞性肝癌術(shù)后總生存率的獨(dú)立預(yù)后影響因子為:肝門(mén)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門(mén)靜脈癌栓及手術(shù)根治性切除率。
　　4、血清CA19-9水平可能代表混合細(xì)胞性肝癌中的膽管細(xì)胞癌成分，但并非影響其預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　第二部分:混合細(xì)胞性肝癌中腫瘤浸潤(rùn)Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)及其與預(yù)后關(guān)系的研究
　　目的:
　　檢測(cè)三種不同類型的原發(fā)性肝癌的腫瘤

7、微環(huán)境中Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和其他類型淋巴細(xì)胞（CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞）的浸潤(rùn)情況及浸潤(rùn)特點(diǎn)，以此評(píng)價(jià)瘤灶內(nèi)和瘤周組織中Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞浸潤(rùn)情況在混合細(xì)胞性肝癌中的預(yù)后價(jià)值。
　　方法:
　　應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)第一部分中的38例混合細(xì)胞性肝癌患者及40例肝細(xì)胞癌和40例膽管細(xì)胞癌患者的石蠟組織標(biāo)本中瘤周和瘤內(nèi)CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)情況，比較分析這些細(xì)胞在三

8、組類型原發(fā)性肝癌組織中表達(dá)的差異性，并分別分析混合細(xì)胞性肝癌組瘤周和瘤內(nèi)組織Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)與CD4+T細(xì)胞數(shù)、CD8+T細(xì)胞數(shù)及其臨床病理特征的相關(guān)性，并分別運(yùn)用單因素分析和多因素分析判斷三組原發(fā)性肝癌組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況與預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、三種類型的原發(fā)性肝癌腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞在癌灶區(qū)域多呈彌散分布，在瘤周組織中，則可見(jiàn)大量的淋巴細(xì)胞密集分布，呈淋巴樣聚集趨勢(shì)，三組類型肝癌瘤周組織浸潤(rùn)

9、的CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均大于瘤內(nèi)組織浸潤(rùn)的相應(yīng)細(xì)胞絕對(duì)數(shù)(P＜0.001)。而混合細(xì)胞性肝癌組中瘤內(nèi)組織的Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值明顯高于瘤周組織(P＜0.001)，膽管細(xì)胞癌組中瘤內(nèi)組織的Foxp3+Treg細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值亦明顯高于瘤周組織(P＜0.001)。
　　2、混合細(xì)胞性肝癌組與肝細(xì)胞癌組間瘤周Foxp3+Treg細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值（P=0.0

10、02）、Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值(P=0.005)及瘤內(nèi)Foxp3+Treg細(xì)胞(P=0.003)、Foxp3+Treg細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值（P=0.004）、Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值(P=0.0005)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3、混合細(xì)胞性肝癌組與膽管細(xì)胞癌組之間瘤周CD8+T細(xì)胞數(shù)目（P=0.017）、Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值(P=0.020)及瘤內(nèi)Foxp3+T

11、reg細(xì)胞數(shù)(P=0.028)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4、混合細(xì)胞性肝癌瘤周組織FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞計(jì)數(shù)與CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.587，P＜0.001)，而與CD4+T細(xì)胞數(shù)目無(wú)明顯相關(guān)性;而瘤內(nèi)組織FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞計(jì)數(shù)與CD8+T細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)均無(wú)顯著相關(guān)性;而僅瘤周Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值與腫瘤細(xì)胞的病理分化程度及門(mén)靜脈癌栓形成顯著相關(guān)。
　　5、單因素

12、生存分析示瘤內(nèi)組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值、瘤周組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目、CD8+T細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是混合細(xì)胞性肝癌預(yù)后相關(guān)因素;瘤內(nèi)組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD4+T細(xì)胞比值、瘤周組織Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是肝細(xì)胞癌的預(yù)后相關(guān)因素;瘤內(nèi)組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目、瘤周組織Fox

13、p3+Treg細(xì)胞數(shù)目、CD8+T細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是膽管細(xì)胞癌的預(yù)后相關(guān)因素。
　　6、多因素分析顯示瘤內(nèi)組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目、瘤周組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是混合細(xì)胞性肝癌的獨(dú)立預(yù)后因素;瘤內(nèi)組織Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)目及瘤周組織Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是肝細(xì)胞癌的獨(dú)立預(yù)后因素;瘤周組織Foxp3+Tre

14、g細(xì)胞數(shù)目及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是膽管細(xì)胞癌的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論:
　　1、三種類型原發(fā)性肝癌的腫瘤微環(huán)境浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的分布均表現(xiàn)為瘤內(nèi)區(qū)呈彌散分布，瘤周區(qū)呈大量集中分布趨勢(shì)，且瘤周組織浸潤(rùn)的CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)均大于瘤內(nèi)組織浸潤(rùn)的相應(yīng)細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。
　　2、混合細(xì)胞性肝癌組腫瘤微環(huán)境浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的免疫學(xué)特征介于肝細(xì)胞癌組與膽管細(xì)胞癌組之間，但更傾向

15、于膽管細(xì)胞癌組。
　　3、混合細(xì)胞性肝癌患者瘤周組織浸潤(rùn)的Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與CD8+T細(xì)胞毒性T細(xì)胞數(shù)量呈顯著負(fù)相關(guān)，且瘤周Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值與腫瘤細(xì)胞的病理分化程度及門(mén)靜脈癌栓形成顯著相關(guān)，且該比值越高，病理分化程度越低，門(mén)靜脈癌栓形成率則越高。
　　4、瘤內(nèi)組織浸潤(rùn)的Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量、瘤周組織浸潤(rùn)Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量及Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是混合

16、細(xì)胞性肝癌的獨(dú)立預(yù)后因素，均與其總生存率顯著負(fù)相關(guān)。且影響肝細(xì)胞癌和膽管細(xì)胞癌獨(dú)立預(yù)后的免疫學(xué)因素均為混合細(xì)胞性肝癌的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　5、瘤周組織浸潤(rùn)的Foxp3+Treg細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值是三類原發(fā)性肝癌共同的獨(dú)立預(yù)后因素，對(duì)原發(fā)性肝癌患者的術(shù)后總生存率起關(guān)鍵作用。
　　第三部分:混合細(xì)胞性肝癌的起源研究
　　目的:
　　探討肝卵圓細(xì)胞與混合細(xì)胞性肝癌起源的相關(guān)性，以期為混合細(xì)胞性肝癌的治療提供新的思

17、路。
　　方法:
　　應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法及免疫熒光化學(xué)方法分別檢測(cè)第一部分中的38例混合細(xì)胞性肝癌患者及40例肝細(xì)胞癌和40例膽管細(xì)胞癌患者癌組織中肝卵圓細(xì)胞表面標(biāo)志物AFP、CK7、CK19、OV-6及C-kit在三類原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)情況，并分別比較混合細(xì)胞性肝癌組與肝細(xì)胞癌組、膽管細(xì)胞癌組之間的差異。
　　結(jié)果:
　　1、混合細(xì)胞性肝癌組CK7陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于肝細(xì)胞癌組(x2=20.53，P＜0.0

18、5)，而與膽管細(xì)胞癌組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　2、混合細(xì)胞性肝癌組CK19陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于肝細(xì)胞癌組(x2=34.78，P＜0.05)，而與膽管細(xì)胞癌組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　3、混合細(xì)胞性肝癌組CK7或CK19陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于肝細(xì)胞癌組(x2=31.39，P＜0.05)，而與膽管細(xì)胞癌組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　4、混合細(xì)胞性肝癌組AFP陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于膽管細(xì)胞癌組(x2=25.97

19、，P＜0.05)，而與肝細(xì)胞癌組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　5、C-kit在三組原發(fā)性肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:混合細(xì)胞性肝癌組為5.26％(2/38)，肝細(xì)胞癌組為0.00％(0/40)，膽管細(xì)胞癌組為0.00％(0/40)。
　　6、混合細(xì)胞性肝癌組OV-6陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于肝細(xì)胞癌組(x2=34.64，P＜0.05)和膽管細(xì)胞癌組(x2=43.49，P＜0.05)。
　　7、混合細(xì)胞性肝癌組CK7或C

20、K19與AFP均陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于肝細(xì)胞癌組（x2=15.00，P＜0.05）和膽管細(xì)胞癌組(x2=23.93，P＜0.05)。
　　8、混合細(xì)胞性肝癌組中，24/31(77.42％)例OV-6陽(yáng)性患者同時(shí)表達(dá)膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物（CK7或CK19）和肝細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(AFP);肝細(xì)胞癌組中，6/6(100.00％)例OV-6陽(yáng)性患者均同時(shí)表達(dá)膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物（CK7或CK19）和肝細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(AFP

21、);膽管細(xì)胞癌組中，3/3(100.00％)例OV-6陽(yáng)性患者均同時(shí)表達(dá)膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物（CK7或CK19）和肝細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(AFP)。
　　9、混合細(xì)胞性肝癌組中，2/2(100.00％)例C-kit陽(yáng)性均同時(shí)表達(dá)膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物（CK7或CK19）和肝細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(AFP)及OV-6。
　　10、混合細(xì)胞性肝癌中肝細(xì)胞癌成分AFP陽(yáng)性表達(dá)率65.79％與肝細(xì)胞癌組57.50％無(wú)顯著差異(P

22、＞0.05)，而明顯高于膽管細(xì)胞癌組10.00％（x2=25.97，P＜0.05）;而其膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(CK7或CK19)陽(yáng)性表達(dá)率86.84％遠(yuǎn)高于單純肝細(xì)胞癌組30.00％(x2=28.49，P＜0.05)，而與膽管細(xì)胞癌組87.50％無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
　　11、混合細(xì)胞性肝癌中膽管細(xì)胞癌成分的肝細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物(AFP)陽(yáng)性表達(dá)率60.53％遠(yuǎn)高于單純膽管細(xì)胞癌組的10.00％(x2=21.98，P

23、＜0.05)，而與單純肝細(xì)胞癌組的57.50％無(wú)顯著差異(P＞0.05)。而其膽管細(xì)胞癌分子表型標(biāo)志物（CK7或CK19），膽管細(xì)胞癌成分的陽(yáng)性表達(dá)率92.11％與單純膽管細(xì)胞癌組的87.50％無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但遠(yuǎn)高于單純肝細(xì)胞癌組的30.00％(x2=31.39，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、混合細(xì)胞性肝癌在分子表型上既具有肝細(xì)胞癌特征，又具有膽管細(xì)胞癌特征。
　　2、OV-6可能是肝卵圓細(xì)胞比較