小鼠脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞在體外對造血功能影響的研究.pdf

1、目的：探討小鼠脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞對造血干/祖細(xì)胞體外擴增的影響并對其機制進行初步研究。
　　方法：無菌條件下獲取C57BL/6小鼠的脂肪源干細(xì)胞（ADSCs），培養(yǎng)至 P3代：
　?、偌?xì)胞形態(tài)學(xué)分析；
　?、诹魇郊?xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面免疫表型；
　　③脂肪源干細(xì)胞定向成骨、成脂細(xì)胞誘導(dǎo)。
　　將小鼠成纖維細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、成骨誘導(dǎo)前后的脂肪源干細(xì)胞經(jīng)絲裂霉素C處理后作為滋養(yǎng)層，以骨髓單個核細(xì)胞（BMNCs

2、）作為長期培養(yǎng)起始細(xì)胞（LTC-IC），對其進行35天長期體外共培養(yǎng)，將本實驗分4組：A組：BMNCs加小鼠成纖維細(xì)胞，B組：BMNCs加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），C組：BMNCs加ADSCs，D組：BMNCs加成骨誘導(dǎo)后的脂肪源干細(xì)胞（osteo-ADSCs）；分別于0 d、14 d、28 d、35 d行甲基纖維素14 d短期處理分析造血干/祖細(xì)胞集落增殖狀態(tài)；同時應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測上清液中的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-

3、1（SDF-1）、N-鈣黏素（N-cadherin）、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、Jagged1蛋白（JAG1）的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1. ADSCs的生物學(xué)分析：ADSCs在體外呈梭形生長并可穩(wěn)定傳代；成骨、成脂誘導(dǎo)均為陽性；流式結(jié)果分析：CD29高表達（95.37±0.95)％；CD34低表達（8.7±0.4）％。
　　2.細(xì)胞體外二維共培養(yǎng)后對造血干/祖細(xì)胞（HSPCs）擴增的影響：
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4、不同時間點造血干/祖細(xì)胞（HSPCs）形成的集落數(shù)不同，且成骨誘導(dǎo)后的脂肪源干細(xì)胞更具有造血支持作用；
　　② SDF-1、N-cadherin、β-catenin、JAG1的表達情況在不同時間點不同，SDF-1、β-catenin的表達結(jié)果顯示：C、D組表達明顯高于A、B兩組（P<0.05）；且C組與D組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而N-cadherin、JAG1在各組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：