姜黃素對自發(fā)性高血壓大鼠全腦缺血再灌注后認知功能和海馬IL-1β、TNF-α、IL-10的影響及機制.pdf

1、目的:觀察自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)全腦缺血再灌注后認知功能和海馬IL-1β、TNF-α、IL-10表達的變化，探討姜黃素對其認知功能和海馬神經(jīng)元的影響及機制。
　　方法:雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠60只，隨機分成2組(n=30):假手術(shù)組（W-Sham）、缺血再灌注組(W-I/R)，雄性SHR90只隨機分成3組(n=30):假手術(shù)組（S-Sham）、缺血再灌注組(S-I/R)、姜黃素組(S-Cur)。W-Sham

2、組和S-Sham組電凝雙側(cè)椎動脈并分離雙側(cè)頸總動脈但不夾閉，腹腔注射玉米油5ml/kg。其余組采用四血管阻斷法建立全腦缺血再灌注模型，其中W-I/R組和S-I/R組于再灌注30min腹腔注射玉米油5ml/kg，S-Cur組于再灌注30min腹腔注射姜黃素100mg/kg。以上各組再根據(jù)再灌注時間分為3h、12h、1d、3d和7d5個亞組，于相應時間點處死，7d組大鼠處死前采用跳臺實驗測定學習和記憶成績。采用蘇木精-伊紅染色觀察海馬CA1

3、區(qū)錐體細胞的形態(tài)改變，尼氏染色計數(shù)海馬CA1區(qū)平均椎體細胞密度，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定新鮮海馬組織IL-1β、TNF-α、IL-10的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.行為學:兩種大鼠假手術(shù)組學習、記憶成績無差別(P＞0.05)。與Sham組相比，W-I/R組和S-I/R組大鼠學習和記憶成績均下降(P＜0.05)。S-I/R組學習和記憶成績錯誤次數(shù)分別為4.8±1.0次和4.7±0.5次，較S-Sham組(1.7±

4、0.5次，1.3±0.5次)明顯增加(P＜0.05)，較W-I/R組（2.7±0.8次，3.2±0.4次）也增加(P＜0.05)。S-Cur組大鼠學習和記憶錯誤次數(shù)分別為2.5±0.9次和2.9±0.4次，較S-I/R組有所改善(P＜0.05)。
　　2.大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞形態(tài)變化:W-Sham組和S-Sham組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞排列整齊，細胞核大而圓，核膜清晰，核仁明顯。W-I/R組和S-I/R組大鼠再灌注12h海馬

5、CA1區(qū)錐體細胞出現(xiàn)輪廓不清，胞漿濃縮，胞核固縮深染;再灌注1d、3d、7d，海馬CA1區(qū)錐體細胞層次減少，分布稀疏，排列散亂，部分細胞核呈碎片狀，S-I/R組損傷更嚴重。相同時間點的S-Cur組與S-I/R組病理變化基本一致，但損傷較輕。
　　3.大鼠海馬CA1區(qū)平均錐體細胞密度:W-Sham組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)平均錐體細胞密度與S-Sham組比較無差異(P＞0.05)。與Sham組比較，W-I/R組和S-I/R組海馬CA

6、1區(qū)平均錐體細胞密度均減少，分別于再灌注1d、3d、7d和再灌注12h、1d、3d、7d差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中再灌注3d時S-I/R組為73.3±8.3個/mm，較S-Sham組(91.1±6.4個/mm)明顯減少(P＜0.05)，S-I/R組海馬CA1區(qū)平均錐體細胞密度較W-I/R組減少。與S-I/R組比較，S-Cur組大鼠海馬CA1區(qū)平均錐體細胞密度于再灌注1d、3d、7d顯著增多(P＜0.05)，其中再灌注3d為9

7、5.4±5.4個/mm。
　　4.大鼠海馬組織IL-1β含量:與W-Sham組比較，S-Sham組IL-1β蛋白表達于再灌注12h下調(diào)（P＜0.05），其余時間點兩組比較無差異(P＞0.05)。W-I/R組海馬IL-1β蛋白表達趨勢與S-I/R組相似，但S-I/R組海馬IL-1β蛋白表達水平在再灌注3h、12h、3d較W-I/R組顯著下調(diào)(P＜0.05)。S-Sham組海馬IL-1β蛋白在12h和1d表達分別為10.64±0.60

8、pg/mg和34.25±0.20pg/mg。與S-Sham組比較，S-I/R組海馬IL-1β蛋白表達于再灌注12h增加，為12.74±1.92pg/mg，再灌注1d達高峰，為36.64±1.14pg/mg，3d、7d仍維持在較高水平。與S-I/R組比較，S-Cur組海馬IL-1β蛋白表達于再灌注12h、1d、3d顯著下調(diào)(P＜0.05)，其中再灌注12h、1d分別為9.67±0.60pg/mg和29.50±1.32pg/mg。
　

9、　5.大鼠海馬組織TNF-α含量:W-Sham組各時間點海馬TNF-α蛋白表達與S-Sham組比較無差異（P＞0.05）。W-I/R組海馬TNF-α蛋白表達趨勢與S-I/R組相似，但S-I/R組海馬TNF-α蛋白表達水平在再灌注3h、12h較W-I/R組顯著上調(diào)(P＜0.05)。S-Sham組海馬TNF-α蛋白在3h、12h、1d表達分別為101.8±6.6pg/mg、77.2±8.1 pg/mg、14.8±3.4pg/mg。與S-Sh

10、am組比較，S-I/R組海馬TNF-α蛋白表達于再灌注3h迅速增加達高峰，達135.7±11.3pg/mg，再灌注12h仍維持較高水平，為107.8±7.7pg/mg，之后逐漸降至一定水平，再灌注1d為21.3±1.2pg/mg。與S-I/R組比較，S-Cur組再灌注各時間點海馬TNF-α蛋白表達顯著下調(diào)(P＜0.05)，其中再灌注3h、12h、1d分別為91.9±11.6pg/mg、74.0±18.3pg/mg、12.9±1.0pg/

11、mg。
　　6.大鼠海馬組織IL-10含量:W-Sham組各時間點海馬IL-10蛋白表達與S-Sham組比較無差異(P＞0.05)。W-I/R組海馬IL-10蛋白表達趨勢與S-I/R組相似，但S-I/R組海馬IL-10蛋白表達水平在再灌注12h、1d較W-I/R組顯著下調(diào)，(P＜0.05)。S-Sham組海馬IL-10蛋白在3h和1d表達分別為885±4pg/mg和945±198pg/mg。與S-Sham組比較，S-I/R組海馬I

12、L-10蛋白表達于再灌注3h下調(diào)，為668±92pg/mg，再灌注12h開始升高，再灌注1d達高峰，達1400±99pg/mg，之后逐漸降低至一定水平。與S-I/R組比較，S-Cur組海馬IL-10蛋白表達于再灌注1d顯著上調(diào)(P＜0.05)，再灌注1d為1872±110pg/mg。
　　結(jié)論:
　　全腦缺血再灌注導致WKY大鼠和SHR認知功能減退、海馬神經(jīng)元損傷，SHR更敏感。大鼠全腦缺血再灌注后可能通過增強IL-1β、T