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1、目的: 研究自噬/Cathepsin L激活機(jī)制在姜黃素(Curcumin)誘導(dǎo)的K562細(xì)胞死亡中的作用,初步探討自噬和溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)在其中的作用機(jī)制。 方法: 用不同濃度的姜黃素處理入侵性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562細(xì)胞,采用MTT法測(cè)定姜黃素對(duì)K562細(xì)胞增殖的抑制作用,應(yīng)用MDC熒光染色和Hoechst33258熒光染色觀察給藥后自噬和凋亡的發(fā)生:免疫組化、流式細(xì)胞儀和West
2、ern blot觀察自噬/Cathepsin L激活機(jī)制在姜黃素誘導(dǎo)的K562細(xì)胞死亡中的分子機(jī)制。 結(jié)果: 姜黃素對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用,且此作用呈明顯的時(shí)間、劑量依賴性;Hoechst33258和MDC熒光染色結(jié)果顯示,姜黃素給藥后可誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬;姜黃素誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí),自噬特異性蛋白MAP LC3、Beclin 1被激活,Cathepsin L在K562細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位激活,且其
3、蛋白表達(dá)增加;姜黃素誘導(dǎo)K562細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下降、細(xì)胞線粒體膜電位下降、Bid被剪切激活成tBid、Caspase-3也被大量激活。用Z-FY-DMK預(yù)先抑制Cathepsin L后與姜黃素單獨(dú)給藥組相比顯示:姜黃素對(duì)K562細(xì)胞的抑瘤率下降、MAP LC3和Beclin 1表達(dá)減少、Bid剪切激活成tBid增加、線粒體膜電位下降幅度變大、Caspase-3激活增加。 結(jié)論: 姜黃素能明顯抑制
4、K562細(xì)胞的生長(zhǎng),并誘導(dǎo)其先后發(fā)生自噬和凋亡。在姜黃素誘導(dǎo)的K562細(xì)胞死亡過程中Cathepsin L發(fā)揮重要作用,它一方面激活自噬發(fā)揮抑瘤作用;另一方面可能通過抑制凋亡發(fā)揮保護(hù)作用。用Z-FY-DMK預(yù)先抑制Cathepsin L與姜黃素單獨(dú)給藥組相比,MAP LC3和Beclin 1表達(dá)減少、Bid剪切激活成tBid及Caspase-3激活增加、線粒體膜電位下降幅度變大,但是,抑瘤率卻明顯降低,說明Cathepsin L對(duì)K56
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