水通道蛋白在氧化性白內(nèi)障的表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的：觀察0型及Ⅰ型水通道蛋白(AQP0和AQP1)在正常及H2O2誘發(fā)的氧化性白內(nèi)障模型大鼠晶狀體上的表達(dá)，探討其在氧化性白內(nèi)障發(fā)生過程中所發(fā)揮的作用。 方法：將健康清潔級(jí)Wistar大鼠78只離體透明晶狀體隨機(jī)均分為2組，實(shí)驗(yàn)組加含2mmol/LH2O2的培養(yǎng)液(即含10％血清的MEM)，對(duì)照組不加H2O2，其余處理同實(shí)驗(yàn)組。每組按不同時(shí)間點(diǎn)(12、24、48h)共設(shè)3個(gè)亞組，每個(gè)亞組13只晶狀體。在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)分別觀察兩組大

2、鼠晶狀體的混濁情況；運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法(SP法)對(duì)AQP1在大鼠晶狀體上的表達(dá)進(jìn)行定位檢測(cè)，并采用HPIAS-1000型醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)半定量檢測(cè)AQP1的表達(dá)；運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測(cè)AQP0和AQP1分別在兩組大鼠晶狀體上的表達(dá)變化；應(yīng)用SPSS¨.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用IndependentSamplesT-Test法和One-Way-ANOVA法分別對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行獨(dú)立樣本

3、T檢驗(yàn)和單因素方差分析，并使用SNK法和LSD法進(jìn)行組間比較。 結(jié)果：加入培養(yǎng)液后48h內(nèi)，對(duì)照組晶狀體仍保持透明，而實(shí)驗(yàn)組的晶狀體有不同程度的混濁；免疫組織化學(xué)和計(jì)算機(jī)圖像分析結(jié)果顯示：AQP1在大鼠晶狀體上陽性表達(dá)的部位位于晶狀體前囊膜的晶體上皮細(xì)胞(lensepithelialcells，LECs)的胞膜，胞膜上可見程度不等的棕黃色顆粒。各亞組均可見到其陽性表達(dá)，各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組晶狀體上的AQP1表達(dá)均較對(duì)照組不同程度減少，

4、差異有顯著性意義(P＜0.05)。各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組AQP1的表達(dá)隨H2O2作用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少，組內(nèi)差異性顯著(P＜0.05)；RT-PCR和計(jì)算機(jī)圖像分析結(jié)果顯示：在mRNA水平，AQP0和AQP1在大鼠晶狀體廣泛表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的晶狀體進(jìn)行RT-PCR均可獲得AQP0和AQP1的陽性目的基因，不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組晶狀體的AQP0和AQP1的表達(dá)均較對(duì)照組有不同程度的減少，而且隨著H2O2作用時(shí)間延長(zhǎng)，各亞組之間AQP0和AQP1的表達(dá)