腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)制劑的篩選和紫草素抗MDR腫瘤活性的研究.pdf

1、該論文以建立的PgP過量表達(dá)的MDR人紅白血病K562/ADR細(xì)胞模型為基礎(chǔ),采用MTT檢測(cè)方法對(duì)建立的30種中草藥單體樣品庫(kù)進(jìn)行定向篩選,以期得到一種具有逆轉(zhuǎn)MDR活性的單體,并進(jìn)一步研究其藥理作用.1.利用抗腫瘤藥物阿霉素誘導(dǎo)K562建立MD亞系K562/ADR,經(jīng)檢測(cè)對(duì)阿霉素耐藥7.8倍,長(zhǎng)春新堿耐藥60倍以上,表阿霉素98倍.并且經(jīng)過耐藥譜的檢測(cè),胞內(nèi)阿霉素的積聚以及PgP的檢測(cè)三種手段都同時(shí)表明,該細(xì)胞模型的MDR機(jī)理是膜蛋白

2、PgP的過量表達(dá)而導(dǎo)致的,其表達(dá)量與陰性對(duì)照組相比高達(dá)88.79％.2.利用MDR細(xì)胞模型K562/ADR對(duì)由30種中草藥單體組成的樣品庫(kù)進(jìn)行MDR逆轉(zhuǎn)制劑的初篩和復(fù)篩,我們發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯在6μg/ml濃度下無(wú)細(xì)胞毒性(存活率>90％),有一定的逆轉(zhuǎn)MDR作用,但效果不強(qiáng).而丹參酮I、隱丹參酮、二氫丹參酮I、紫草素則具有細(xì)胞殺傷作用,而以紫草素的殺傷作用最強(qiáng),和厚樸酚兼有殺傷和逆轉(zhuǎn)作用,但都不是很強(qiáng).3.確定紫草素為研究對(duì)象,我們發(fā)現(xiàn)紫

3、草科多年生草本植物紫草的有效成分單體紫草素具有非常強(qiáng)的抗多藥耐藥腫瘤細(xì)胞的功能.細(xì)胞經(jīng)紫草素誘導(dǎo)后,基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖中Ladder及流式細(xì)胞儀分析圖中亞二倍體峰的的出現(xiàn),染色后油鏡觀察細(xì)胞形態(tài)上的變化,及Caspase-3酶的激活,這些都表明紫草素的抗腫瘤作用機(jī)理是誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,并且經(jīng)比較具有對(duì)親本細(xì)胞K562和耐藥細(xì)胞K562/ADR效應(yīng)相當(dāng)?shù)奶攸c(diǎn).同時(shí)通過MTT檢測(cè)紫草素對(duì)兩種細(xì)胞的殺傷作用所得IC50非常接近,分別

4、為0.436μg/ml和0.445μg/ml,而HPLC檢測(cè)胞內(nèi)藥物積聚和滯留濃度表明紫草素被吸收轉(zhuǎn)化為某種化合物,并且該化合物的濃度隨時(shí)間變化關(guān)系對(duì)兩種細(xì)胞是一致的.這進(jìn)一步說明紫草素對(duì)兩種細(xì)胞的作用相當(dāng).結(jié)論:通過藥物篩選,我們發(fā)現(xiàn)了中草藥單體紫草素具有誘導(dǎo)敏感細(xì)胞K562和MDR細(xì)胞K562/ADR凋亡的抗腫瘤作用,并且對(duì)兩者的效應(yīng)相當(dāng),具有克服MDR的特點(diǎn).并且對(duì)可能的誘導(dǎo)凋亡途徑作了探討,對(duì)有些還未明確的結(jié)論提出了下一步的設(shè)想