白藜三醇對(duì)缺氧條件下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管形成作用的影響.pdf

1、目的：通過氯化鈷(CoCl2)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humen umbilical veinendothelial cell,HUVEC)建立化學(xué)缺氧模型，觀察缺氧內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成情況，以及應(yīng)用白藜三醇(Resveratrol，Res)后HIF-1α、VEGF、p-Akt的蛋白變化，探討Res對(duì)缺氧的HUVEC的血管生成作用的影響及可能機(jī)制，為Res治療心血管疾病提供新的理論依據(jù)。
　　方法：通過100μmol/L氯化鈷建立化學(xué)

2、缺氧模型，體外培養(yǎng)HUVEC(1)實(shí)驗(yàn)分五組:高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)組（對(duì)照組）、CoCl2誘導(dǎo)細(xì)胞缺氧組（缺氧組）、缺氧+LY294002組（阻斷劑組）、缺氧+Res組（藥物組）、缺氧+Res+LY294002組（藥物阻斷劑組）。Res預(yù)孵育2h，LY29400210μmol/L預(yù)孵育1h。
　　(2)采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;
　　(3)采用蛋白免疫印跡(western blot)檢測(cè)低氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)

3、、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表達(dá);
　　(4)采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)低氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）的蛋白表達(dá);
　　(5)采用transwell chamber檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力;
　　(6)小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的體外血管形成能力。
　　結(jié)果：(1) CCK8:缺氧組與正常組相比細(xì)胞增殖增加（P＜0.01）;藥物組(0.1，1，5，10,50

4、μmol/L)與正常組相比細(xì)胞增殖增加(P＜0.01);藥物組(1，5μmol/L)與缺氧組比細(xì)胞增殖增加(P＜0.01)。尤其藥物組5μmol/L細(xì)胞增殖明顯增加(P＜0.01);藥物組（0.1，10μmol/L）與缺氧組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥物組（50μmol/L）與其他各組相比細(xì)胞數(shù)明顯減少（P＜0.01）。
　　(2) Western blot:與對(duì)照組比較，缺氧組HIF-1α(P＜0.05)、VEGF(P＜0.05)、

5、p-Akt(P＜0.05)蛋白表達(dá)增加;與缺氧組比較，阻斷劑組HIF-1α(P＜0.05)、VEGF（P＜0.05）、p-Akt(P＜0.05)蛋白表達(dá)減低，藥物組HIF-1α(P＜0.01)、VEGF(P＜0.01)、p-Akt（P＜0.01）蛋白表達(dá)增加;與阻斷劑組比較，藥物阻斷劑組HIF-1α、VEGF、p-Akt變化無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(3)免疫細(xì)胞化學(xué):缺氧組:胞內(nèi)HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)，顯色呈黃褐色;

6、阻斷劑組:胞內(nèi)HIF-1α表達(dá)減弱，顯色呈淺黃棕色;藥物組（選取Res為5μmol/L）:胞內(nèi)HIF-1α強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，顯色呈深黃褐色;藥物阻斷劑組:胞內(nèi)HIF-1α表達(dá)較藥物組減弱，呈淺黃褐色。
　　(4) transwell chamber:藥物組內(nèi)皮細(xì)胞遷移率大于缺氧組（P＜0.01），阻斷劑組內(nèi)皮細(xì)胞遷移率小于缺氧組（P＜0.01）。
　　(5)小管形成實(shí)驗(yàn):藥物組在體外的血管形成數(shù)量明顯大于缺氧組（P＜0.01）。阻