8-異丙胺亞甲基橙皮素(IPHP)在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究和體外跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的初探.pdf

1、橙皮素（hesperetin）為蕓香科柑橘屬植物果實(shí)提取物，是廣泛存在于柚子和橙子中二氫黃酮類化合物，具有廣泛的藥理學(xué)特性，包括抗炎、抗氧化、抗腫瘤等活性。橙皮素口服以后生物利用度較好，但是半衰期較短，口服給藥以后體內(nèi)消除較快，為了維持有效血藥濃度，需要頻繁給藥，這一缺點(diǎn)限制了其在臨床上的應(yīng)用。為了克服這一缺點(diǎn)，本課題組通過(guò)化學(xué)合成的方法，合成了一系列的橙皮素衍生物并對(duì)其藥理活性進(jìn)行了篩選。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)7,3′-二甲氧基橙皮素(

2、7,3′-dimethoxy hesperetin，DMHP)具有較強(qiáng)抗炎活性,對(duì)A A大鼠繼發(fā)性炎癥具有良好的治療作用。前期研究還發(fā)現(xiàn)8-異丙胺亞甲基橙皮素(IPHP)，在體外具有良好的抗炎活性，對(duì)于由LPS刺激RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α和IL-6具有明顯的抑制作用。該實(shí)驗(yàn)的目的是建立IPHP在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究方法，對(duì)其進(jìn)行早期藥動(dòng)學(xué)研究，同時(shí)利用MDCK細(xì)胞模型來(lái)模擬小腸上皮細(xì)胞對(duì)IPHP的吸收情況，通過(guò)對(duì)MDCK細(xì)胞

3、膜上轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如P糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥蛋白（MRP2）的研究來(lái)探討其吸收及外排機(jī)制，為以后的藥理學(xué)研究提供依據(jù)，為將來(lái)的臨床前研究提供思路。本實(shí)驗(yàn)的主要內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面：
　　1.IPHP在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究
　　40只SD大鼠隨機(jī)分為：橙皮素組（100mg/kg），IPHP低，中，高劑量組（25,50，100mg/kg）和IPHP靜脈注射組（25mg/kg），每組8只。灌胃，靜脈給藥后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠眼底靜脈叢

4、取血，用本實(shí)驗(yàn)建立的 HPLC法測(cè)定血漿中的橙皮素和IPHP的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線，計(jì)算藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，分別計(jì)算IPHP在低中高3個(gè)不同濃度的Tmax(h)：2.3±0.67、2.40±0.55、2.10±0.55；t1/2(h)：6.37±1.91、6.45±1.93、6.61±1.98；Cmax(μg/ml)：1.15±0.32、2.60±0.70、4.36±1.18；AUC(mg/L·h)：9.34±1.68

5、、22.98±4.14、41.63±7.49。橙皮素的Tmax(h)為0.35±0.11，t1/2(h)：3.07±1.12；Cmax(ug/ml)：4.56±1.09，AUC(mg/L·h)：50.23±12.22。與等劑量組的橙皮素相比，IPHP的半衰期明顯延長(zhǎng)，血藥濃度液維持在較高的水平，達(dá)峰時(shí)間延遲，相對(duì)生物利用度提高了。
　　2. IPHP在MDCK單層細(xì)胞模型上的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)的研究
　　MTT法篩選出安全的適合跨

6、細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物濃度（120μΜ以內(nèi)），藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的實(shí)驗(yàn)分組：7.5,15,30,60,120μΜ五個(gè)藥物濃度組以及溫度，pH，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑組。探討藥物濃度、pH、溫度、P-gp抑制劑維拉帕米、MRP2抑制劑MK-571和丙磺舒對(duì)IPHP在體外細(xì)胞模型上跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。實(shí)驗(yàn)取的樣品通過(guò)上述建立的HPLC法測(cè)定血漿中的藥物的濃度，根據(jù)所得的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線，計(jì)算藥物濃度，根據(jù)公式Papp=(dQ/dt)/A×C0和ER=Papp

7、(BL-AP)/Papp(AP-BL)計(jì)算不同濃度藥物的Papp(AP-BL)(×10–5)(cm·s-1)：1.49±1.20、2.81±1.20、3.28±0.45、3.45±1.30、3.47±1.27。Papp(BL-AP)(×10–5)(cm·s-1):2.12±0.728、3.87±0.364、4.27±1.16、4.08±2.68、4.15±3.66。外排率分別為：1.41、1.37、1.3、1.18、1.19。溫度和pH