APA微囊化轉前腦啡肽原基因細胞移植鎮(zhèn)痛的實驗研究.pdf

1、慢性疼痛基因治療的靶組織主要集中在中樞神經系統(tǒng)。中樞神經系統(tǒng)雖為“免疫特惠”區(qū)域，但異體細胞移植仍然存在一定的免疫排斥反應，從而影響移植細胞的存活時間?；蚬こ碳毎浦叉?zhèn)痛，還存在致瘤性問題。而微囊技術則為這一難題提供了可行的解決方案。采用微囊技術包裹細胞后，由于微囊包膜的免疫隔離作用，避免了細胞遭到受者免疫系統(tǒng)的直接攻擊，延長其在機體內的生存時限。逆轉錄病毒載體轉載PENK基因至靶細胞中，并且使用微囊包裹后進行細胞移植，是否能夠起到鎮(zhèn)

2、痛作用，國內外均未見報道。 本研究分別以鼠和人前腦啡肽原基因為目的基因，設計引物，內側引物加上兩個酶切位點，分別同逆轉錄病毒載體pLNCX2及質粒載體pCDNA3.1(+)多克隆位點相一致，并成功構建了pLNCX2一rPENK載體、pLNCX2一hPENK載體和pCDNA3.1(+)一hPENK載體；將pLNCX2一rPENK載體轉染病毒包裝細胞PT67，收集病毒上清轉染NIH3T3細胞，分別從RNA水平及蛋白表達水平檢測PEN

3、K基因的表達，驗證腦啡肽分泌量是否可以滿足動物實驗鎮(zhèn)痛需要，為進一步微囊包裹及動物實驗奠定了基礎；本研究還將獲得的穩(wěn)定表達前腦啡肽原基因的細胞，直接或采用海藻酸鈉一多聚賴氨酸一海藻酸鈉(APA)微囊化包裹植入大鼠脊髓蛛網(wǎng)膜下腔，該方法避免轉基因細胞造成的潛在致癌性及機體的免疫反應，比較兩種細胞移植方法所引起的鎮(zhèn)痛行為學變化；了解APA微囊化轉前腦啡肽原基因細胞植入對慢性疼痛的鎮(zhèn)痛效應和可能機制；進一步了解APA微囊的免疫隔離效果，為AP

4、A微囊化細胞脊髓蛛網(wǎng)膜下腔移植鎮(zhèn)痛技術提供更加充足的實驗資料。 結論: 1．以大鼠及人前腦啡肽原基因為目的基因，成功構建了大鼠及人前腦啡肽原基因逆轉錄病毒載體。 2．提取NIH3T3陽性克隆細胞的基因組DNA，PCR擴增出逆病毒載體neor基因片段；通過RT-PCR、原位雜交和放射免疫檢測，從RNA水平及蛋白水平均證實大鼠PENK基因的表達。表明大鼠PENK基因可以整合到NIH3T3細胞染色體中，并能長期穩(wěn)定表達