細(xì)胞凋亡及Fas-Fas-L mRNA在EV71感染死亡病例中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：重癥腸道病毒71型(EV71)感染患者經(jīng)常出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，短期內(nèi)少數(shù)患者可出現(xiàn)肺水腫、肺出血等嚴(yán)重并發(fā)癥，病死率高，但其神經(jīng)源性肺水腫確切的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。Fas是一種細(xì)胞表面的受體，在多種組織中表達(dá)，其配體是FasL，兩者相互結(jié)合可傳遞凋亡信號，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡。這可能是EV71侵犯神經(jīng)系統(tǒng)引起嚴(yán)重疾病的關(guān)鍵因素之一。因此，本課題首次體內(nèi)研究EV71感染引起腦炎合并肺水腫肺出血患者腦細(xì)胞凋亡及對Fas、FasL表達(dá)的影響

2、，探討是否在EV71感染的危重患兒引起腦細(xì)胞凋亡和衰減的現(xiàn)象。為闡明EV71感染后引起神經(jīng)源性肺水腫的機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　方法：回顧性收集2010年3月-2013年6月桂林市7家醫(yī)院收治的9例EV71重癥感染并發(fā)肺水腫死亡病例以及同時期桂林市5家醫(yī)院收治的7例未感染EV71，而出現(xiàn)肺水腫、肺淤血等并發(fā)癥死亡病例的臨床資料，對患兒尸體系統(tǒng)解剖，對腦、心、肺行HE染色了解病理特征，TUNEL法檢測凋亡細(xì)胞，免疫組化檢測Fas蛋白，

3、原位雜交法檢測Fas-L mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴感染組病例入院后即出現(xiàn)嘔吐、驚跳及四肢抖動等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。⑵HE染色:感染組各器官病理學(xué)檢查可見腦組織有局部軟化灶及衛(wèi)星現(xiàn)象，肺組織可見肺泡腔塌陷，部分肺泡腔內(nèi)充滿水腫液，心肌組織未見明顯異常。對照組各器官腦組織及心肌組織未見異?？梢姡闻萁M織可見肺泡腔內(nèi)存在粉紅色均質(zhì)水腫液。⑶TUNEL結(jié)果:感染組腦、肺及心肌組織均檢測到凋亡細(xì)胞，陽性檢出率100％。①組內(nèi)腦、肺及心肌組織比

4、較:感染組腦組織細(xì)胞凋亡明顯，凋亡指數(shù)高，與感染組心肌組織和肺泡組織進(jìn)行兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);感染組心肌組織及肺泡組織均可見少量凋亡細(xì)胞，凋亡指數(shù)較低，兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對照組腦、肺及心肌組織均出現(xiàn)少量凋亡細(xì)胞，組內(nèi)各器官比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②組間腦、肺及心肌組織比較:感染組與對照組相對應(yīng)各器官進(jìn)行比較，除腦組織差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)外，心、肺差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P＞0.05)。⑷Fas蛋白結(jié)果:①組內(nèi)腦、肺及心肌組織比較:感染組腦、肺及心肌組織均檢測到Fas蛋白。感染組腦組織細(xì)胞Fas蛋白表達(dá)明顯，有較強(qiáng)信號，與感染組心肌組織和肺泡組織進(jìn)行兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);感染組心肌組織及肺泡組織均可見少量Fas蛋白表達(dá)，表達(dá)信號較弱，兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對照組腦、肺及心肌組織均出現(xiàn)少量Fas蛋白表達(dá)，組內(nèi)各器官比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②組

6、間腦、肺及心肌組織比較:感染組與對照組相對應(yīng)各器官進(jìn)行比較，除腦組織差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)外，心、肺差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(5) Fas-L mRNA結(jié)果:原位雜交陽性信號為棕藍(lán)色顆粒，主要集中在胞漿內(nèi)。原位雜交檢測FasL mRNA與免疫組化檢測Fas蛋白表達(dá)變化趨勢相同。①組內(nèi)腦、肺及心肌組織比較:感染組腦、肺及心肌組織均檢測到Fas-L mRNA。感染組腦組織細(xì)胞Fas-L mRNA表達(dá)明顯，有較強(qiáng)信號，與

7、感染組心肌組織和肺泡組織進(jìn)行兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);感染組心肌組織及肺泡組織均可見少量Fas-L mRNA表達(dá)，表達(dá)信號較弱，兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。對照組腦、肺及心肌組織均出現(xiàn)少量Fas-L mRNA表達(dá)，組內(nèi)各器官比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②組間腦、肺及心肌組織比較:感染組與對照組相對應(yīng)各器官進(jìn)行比較，除腦組織差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)外，心、肺差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.