EV71感染患兒細(xì)胞免疫功能和外周血單個(gè)核細(xì)胞Toll樣受體的變化及臨床意義.pdf

1、目的：
　　檢測腸道病毒71型(Enterovirus71,EV71)感染患兒細(xì)胞免疫功能的變化及外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)3、4、7mRNA的表達(dá)。探討細(xì)胞免疫功能及Toll樣受體信號通路在EV71致病機(jī)制中的作用,為EV71致病機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分：收

2、集確診為EV71感染的患兒55例,分為輕癥組、重癥組、危重癥組,其中輕癥組患兒20例,重癥組患兒25例,危重癥組患兒10例。對EV71感染患兒臨床資料進(jìn)行分析并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其外周血B細(xì)胞、T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)量。
　　第二部分：選擇同期門診體檢正常的兒童18例作為正常對照組。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法檢測EV7

3、1感染患兒及正常對照組兒童PBMCTLR3、TLR4、TLR7mRNA的表達(dá),通過TLR3基因=TLR3基因表達(dá)/β-actin表達(dá)、TLR4基因=TLR4基因表達(dá)/β-actin表達(dá)和TLR7基因=TLR7基因表達(dá)/β-actin表達(dá)計(jì)算檢測基因的表達(dá)水平。應(yīng)用ELISA方法檢測EV71感染患兒及正常對照組兒童外周血血漿細(xì)胞因子IL-6、IL-10、TNF-α的水平。
　　結(jié)果：
　　1.臨床資料分析:55例EV71感染患

4、兒中輕癥組患兒20例,男11例,女9例,平均年齡(月)29.2±17.8;重癥組患兒25例,男9例,女16例,平均年齡(月)30.7±16;危重癥組患兒10例,男6例,女4例,平均年齡(月)26.1±18.7。三組性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=2.393,p=0.331;F=0.149,p>0.05)。25例重癥組患兒中合并急性馳緩性麻痹4例。輕癥組及重癥組患兒均痊愈出院,10例危重癥患兒因腦干腦炎、神經(jīng)源性肺水腫、呼吸衰竭需機(jī)械通

5、氣6例,死亡3例,放棄治療1例,痊愈出院6例。入院前發(fā)熱天數(shù)三組之間比較無差異(F=2.39,p>0.05)?；純翰〕讨凶罡唧w溫三組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,重癥組、危重癥組患兒最高體溫明顯高于輕癥組(p>0.05)?；純喝朐簳r(shí)測血糖、白細(xì)胞數(shù)量、中性粒細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量危重癥患兒比重癥患兒、輕癥患兒明顯增高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　2.外周血T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞數(shù)量變化:EV71感染患兒CD3+、CD4+、CD8

6、+T淋巴細(xì)胞數(shù)量在重癥組、危重癥組均出現(xiàn)明顯下降。其中危重癥患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、NK細(xì)胞數(shù)量與輕癥組、重癥組相比明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。B淋巴細(xì)胞絕對計(jì)數(shù)在各組間無明顯差異。
　　3.Toll樣受體表達(dá)情況:EV71感染患兒(包括輕癥組、重癥組、危重癥組)PBMCTLR4、TLR7mRNA的表達(dá)較正常對照組顯著增高,而三組間比較發(fā)現(xiàn)重癥組患兒TLR4、TLR7mRNA表達(dá)較輕癥組、危重癥組患兒

7、明顯增高。EV71感染輕癥組患兒TLR3mRNA表達(dá)明顯高于正常對照組、重癥組、危重癥組(p<0.05),而危重癥組患兒與正常對照組及重癥組患兒相比明顯下降(p<0.05)。
　　4.細(xì)胞因子水平變化:對EV71感染患兒進(jìn)行細(xì)胞因子檢測發(fā)現(xiàn)危重癥組患兒外周血中IL-6的水平明顯增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。抗炎癥細(xì)胞因子IL-10的水平在各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),隨著病情加重,IL-10的水平不斷升高。

8、促炎癥細(xì)胞因子TNF-α在危重癥患兒中出現(xiàn)明顯下降,與輕癥患兒、重癥患兒相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。IL-10/TNF-α隨著病情嚴(yán)重不斷增高(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.EV71感染危重癥組患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、NK細(xì)胞數(shù)量明顯下降。B淋巴細(xì)胞數(shù)量在各組間無明顯差異。
　　2.EV71感染患兒存在明顯的免疫功能異常,TLR3mRNA的表達(dá)在危重組患兒中出現(xiàn)明顯下降,而重癥組患兒TLR