巴西固氮螺菌Sp7中與NifA有相互作用的因子的篩選和功能分析.pdf

1、在巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp7中,NifA蛋白是固氮基因(nif gene)的轉錄激活蛋白,篩選和鑒定與其有相互作用的因子是研究NifA蛋白的一個途徑.首先,將A.brasilense Sp7的nifA全序列構建在pGBD-C2載體上,得到重組質(zhì)粒pGBD-nifA,以其為誘鉺,篩選Sp7質(zhì)?；蚪M文庫(構建在pGBD系列質(zhì)粒上).誘鉺質(zhì)粒和文庫質(zhì)粒共轉化釀酒酵母(Saccharomyces ce

2、revisiae)PJ69-4A,通過檢測報告基因his3、ade2及l(fā)acZ的表達進行篩選,初篩選得到109個陽性酵母菌落.分別對其中的AD/library質(zhì)粒進行分離純化,將每個純化質(zhì)粒再次與誘鉺質(zhì)粒共轉化酵母PJ69-4A進行驗證,得到11個陽性克隆,測序結果顯示其中有4個不同的基因片段,分別命名為S4、S35、S64和S65.對這4個片段進行核甘酸序列和蛋白序列的同源性比對,發(fā)現(xiàn)它們與一些功能保守的結構域具有同源性.為了進一步驗