NGX6蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及其與VEGF表達(dá)和LMVD的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分鼻咽癌中NGX6蛋白的表達(dá)及其意義 目的：研究鼻咽癌中鼻咽癌相關(guān)基因6(nasopharyngeal carcinoma associatedgene6，NGX6)在蛋白水平的表達(dá)，及其與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及T、N和臨床分期等因素的關(guān)系。 方法：實(shí)驗(yàn)一采用EnVision二步法(Enhance Labelled Polymer System，ELPS法)進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)20例鼻咽部非腫瘤性上皮組織(A

2、組)、32例不伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織(B組)及48例伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織(C組)中NGX6蛋白的表達(dá)情況；結(jié)合患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T、N分期和臨床分期等多個(gè)因素，分析NGX6蛋白表達(dá)在鼻咽癌發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程中的意義。 實(shí)驗(yàn)二采用Western Blot法，檢測(cè)4例鼻咽部非腫瘤性上皮組織(A組)、6例不伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織(B組)及10例伴頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織(C組)中NGX6蛋白的表達(dá)情況；分析

3、NGX6蛋白表達(dá)與鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一中NGX6蛋白的免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，定位于鼻咽部上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿內(nèi)。A、B、C三組中NGX6蛋白陽性表達(dá)率呈逐級(jí)下降趨勢(shì)。非鼻咽癌組的NGX6蛋白陽性表達(dá)率為85％(17/20)，明顯高于鼻咽癌組的NGX6蛋白陽性表達(dá)率52.5％(42/80)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.9864，P＜0.01)；非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的NGX6蛋白陽性表達(dá)率為68.75％

4、(22/32)，明顯高于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的NGX6蛋白陽性表達(dá)率41.67％(20/48)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.6475，P＜0.025)。 實(shí)驗(yàn)一鼻咽癌組織中T2期和T3/4期的NGX6蛋白陽性表達(dá)率(45.24％、18.18％)均較T1期(77.78％)明顯降低(P＜0.01，P＜0.005)；但是T2期和T3/4期鼻咽癌的NGX6蛋白陽性表達(dá)率無顯著性差異(P＞0.05)。N2/3期的NGX6蛋白陽性表達(dá)率(26.92

5、％)較N0和N1期的NGX6蛋白陽性表達(dá)率(68.75％、59.09％)均明顯降低(P＜0.005，P＜0.025)；但是N0期和N1期鼻咽癌的NGX6蛋白陽性表達(dá)率無顯著性差異(P＞0.05)。Ⅲ/Ⅳ期的NGX6蛋白陽性表達(dá)率(36.37％)較Ⅰ/Ⅱ期(72.22％)明顯降低(P＜0.005)。此外，鼻咽癌中NGX6蛋白陽性表達(dá)率在不同性別及年齡間無顯著差異(P＞0.05)。 實(shí)驗(yàn)二A、B、C三組中NGX6蛋白的相對(duì)積分光密度

6、值呈逐級(jí)下降趨勢(shì)，三組間差異有顯著性(F=38.02，Pr＜0.0001)；非鼻咽癌組的NGX6蛋白的相對(duì)積分光密度值(0.9098±0.2673)高于非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組(0.3218±0.2003)(P＜0.05)，而非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的NGX6蛋白的相對(duì)積分光密度值(0.3218±0.2003)高于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的NGX6蛋白的相對(duì)積分光密度值(0.0875±0.0432)(P＜0.05)。 結(jié)論：鼻咽癌中NGX6在蛋白水平存在表達(dá)下

7、調(diào)，并且其下調(diào)程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，鼻咽癌中NGX6蛋白表達(dá)越低，預(yù)示著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率越高；鼻咽癌中NGX6蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期、N分期及臨床分期均顯著相關(guān)，但是與患者年齡和性別無關(guān)。因此，NGX6蛋白的檢測(cè)有可能有助于鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)，并有利于預(yù)后的判斷。 第二部分 NGX6蛋白表達(dá)與LMVD的關(guān)系 目的：研究鼻咽組織中NGX6蛋白表達(dá)與微淋巴管密度(lymphatic microvesseld

8、ensity，LMVD)的相關(guān)性，探討NGX6對(duì)腫瘤淋巴管生成可能存在的調(diào)節(jié)作用。 方法：材料來源同第一部分實(shí)驗(yàn)一。采用EnVision二步法進(jìn)行D2-40的免疫組化染色，計(jì)算各樣本的淋巴管密度；分析LMVD與NGX6蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果：D2-40免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，定位于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞漿中。A、B、C三組的LMVD值呈逐級(jí)上升趨勢(shì)，非鼻咽癌組的LMVD值(3.45±1.94)低于非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組(6.0

9、2±2.96)，非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的LMVD值低于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組(10.99±5.10)，三組間差異有顯著性(F=29.98，Pr＜0.0001)。NGX6蛋白表達(dá)與LMVD值存在明顯的負(fù)相關(guān)(rs=-0.73221，P＜0.0001)，NGX6蛋白表達(dá)水平越高，LMVD值越小。 結(jié)論：鼻咽癌中LMVD增高，并且其增高程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，鼻咽癌中LMVD越高，預(yù)示著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率越高；鼻咽癌中LMVD與NGX6蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相

10、關(guān)，提示NGX6的表達(dá)缺失和高LMVD在鼻咽癌的發(fā)展中起協(xié)同作用，且NGX6可能具有抑制腫瘤淋巴管生成的作用。 第三部分 NGX6蛋白表達(dá)與VEGF蛋白表達(dá)的關(guān)系 目的：研究鼻咽組織中NGX6蛋白與血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)表達(dá)的相關(guān)性，探討NGX6對(duì)鼻咽癌細(xì)胞中VEGF蛋白表達(dá)可能存在的調(diào)節(jié)作用。 方法：實(shí)驗(yàn)一材料來源同第一部分實(shí)驗(yàn)一。采用E

11、nVision二步法進(jìn)行免疫組化染色，檢測(cè)并分析各組鼻咽組織中VEGF蛋白的表達(dá)情況；分析VEGF蛋白表達(dá)與LMVD的相關(guān)性；分析VEGF蛋白表達(dá)與NGX6蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 實(shí)驗(yàn)二材料來源同第一部分實(shí)驗(yàn)二。采用Western Blot法，檢測(cè)并分析各組鼻咽組織中VEGF蛋白的表達(dá)情況；分析VEGF蛋白表達(dá)與NGX6蛋白表達(dá)的相關(guān)性。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)一中VEGF蛋白免疫陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，定位于鼻咽部上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的細(xì)

12、胞漿內(nèi)。A、B、C三組中VEGF蛋白陽性表達(dá)率呈逐級(jí)上升趨勢(shì)。非 非鼻咽癌組的VEGF蛋白陽性表達(dá)率為55％(11/20)，明顯低于鼻咽癌組的陽性表達(dá)率86.25％(69/80)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.7656，P＜0.005)；非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的VEGF蛋白陽性表達(dá)率為78.13％(25/32)，明顯低于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的陽性表達(dá)率91.67％(44/48)，但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=2.9688，P＞0.05)。VEGF蛋

13、白表達(dá)與LMVD值存在明顯的正相關(guān)(rs=0.73332，P＜0.0001)，VEGF蛋白表達(dá)水平越高，LMVD值越大。VEGF蛋白表達(dá)與NGX6蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.59988，P＜0.0001)，NGX6蛋白表達(dá)水平越低，VEGF蛋白表達(dá)水平越高。 實(shí)驗(yàn)二中A、B、C三組中VEGF蛋白的相對(duì)積分光密度值呈逐級(jí)增加趨勢(shì)，三組間差異有顯著性(F=20.13，Pr＜0.0001)；非鼻咽癌組的VEGF蛋白的相對(duì)積分光密

14、度值(0.5419±0.1993)低于非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的相對(duì)積分光密度值(1.3748±0.3665)(P＜0.05)，非轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的VEGF蛋白的相對(duì)積分光密度值(1.3748±0.3665)低于轉(zhuǎn)移鼻咽癌組的相對(duì)積分光密度值(1.9939±0.4506)(P＜0.05)。VEGF蛋白與NGX6蛋白的相對(duì)積分光密度值呈顯著負(fù)相關(guān)(rs=-0.80902，P＜0.0001)，隨著NGX6蛋白相對(duì)積分光密度值越低，VEGF蛋白相對(duì)積分光密

15、度值越高。 結(jié)論：鼻咽癌中存在VEGF蛋白過度表達(dá)，并且其表達(dá)程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，鼻咽癌中VEGF蛋白表達(dá)越高，預(yù)示著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率越高；鼻咽癌中VEGF蛋白表達(dá)與NGX6蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示NGX6的表達(dá)缺失和VEGF的高表達(dá)在鼻咽癌的發(fā)展中起協(xié)同作用，VEGF表達(dá)可能受抑癌基因NGX6的負(fù)調(diào)控；鼻咽癌中LMVD值與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，進(jìn)一步驗(yàn)證了VEGF對(duì)腫瘤淋巴管生成的促進(jìn)作用。因此，聯(lián)合檢測(cè)NGX6蛋白、V