腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的VEGF-,165-基因轉(zhuǎn)移改善小型豬慢性心肌缺血的研究.pdf

1、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）基因治療是促血管生成治療的研究熱點(diǎn)。腺相關(guān)病毒（AAV）是一種新型載體，具有眾多優(yōu)點(diǎn)。研究表明，在小型動(dòng)物急性下肢動(dòng)脈或冠狀動(dòng)脈閉塞模型上，AAV介導(dǎo)的VEGF基因轉(zhuǎn)移能夠促進(jìn)缺血組織側(cè)支血管形成。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖窃谛⌒拓i慢性心肌缺血模型上，觀(guān)察重組腺相關(guān)病毒2型載體(rAAV2)介導(dǎo)的VEGF165基因轉(zhuǎn)移促進(jìn)冠狀動(dòng)脈側(cè)支形成和改善缺血心肌血流及心功能的有效性。 第一部分：結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支建立小型豬

2、急性冠狀動(dòng)脈閉塞模型，經(jīng)微開(kāi)胸心肌內(nèi)注射rAAV2-VEGF165，并按劑量分成四個(gè)亞組: 1′1011 virus.genome (v.g)、 5′1011v.g、 1′1012v.g、 5′1012v.g。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、免疫組織化學(xué)染色、血管計(jì)數(shù)和冠狀動(dòng)脈造影術(shù)檢測(cè)VEGF基因在心肌中的表達(dá)、評(píng)價(jià)其生物學(xué)作用并找出最合適劑量。結(jié)果各亞組均獲得VEGF的有效表達(dá)且表達(dá)量隨劑量而增加；1′1012v.g組及5′

3、1012v.g組心肌毛細(xì)血管密度和冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán)分級(jí)明顯增加且兩組之間無(wú)明顯差異，故以1′1012v.g為最合適劑量。 第二部分：以Ameroid Constrictor建立小型豬慢性心肌缺血模型，經(jīng)心電圖、冠狀動(dòng)脈造影和核磁共振（MRI）確認(rèn)左冠狀動(dòng)脈回旋支閉塞或相應(yīng)心肌缺血后，經(jīng)微開(kāi)胸導(dǎo)入rAAV2-VEGF1651′1012v.g。采用RT-PCR、Western Blot及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)VEGF的表達(dá)，通過(guò)心肌血

4、管計(jì)數(shù)、冠狀動(dòng)脈造影和MRI觀(guān)察其生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果放置Ameroid Constrictor后5周，所有動(dòng)物均成功建立慢性心肌缺血模型。導(dǎo)入基因后3個(gè)月外源VEGF 基因仍持續(xù)表達(dá)，6個(gè)月時(shí)表達(dá)下降。治療后心肌毛細(xì)血管和小動(dòng)脈密度均增加，心肌血流灌注明顯改善，左心室收縮功能無(wú)顯著變化。 結(jié)論 本研究初步證實(shí)了rAAV2-VEGF165能夠促進(jìn)小型豬慢性缺血心肌血管生成并改善心肌血流灌注，為rAAV2-VEGF165在冠心