皮膚微透析分析方法的構(gòu)建及外用制劑體內(nèi)經(jīng)皮吸收的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)或局部用藥后，藥物對(duì)靶點(diǎn)的藥效作用主要取決于藥物濃度和藥物與受體之間的親和力。其中藥物與受體之間的親和力由藥物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)決定，因此靶組織的藥物濃度是調(diào)節(jié)藥物藥效作用的主要手段。皮膚病皮損的治療可以通過(guò)系統(tǒng)用藥或局部用藥進(jìn)行，但針對(duì)皮損局部靶組織發(fā)揮藥理作用的兩種途徑的藥物需了解靶皮損內(nèi)的藥物濃度，一如作用于皮膚病的系統(tǒng)發(fā)病環(huán)節(jié)靶點(diǎn)需要了解血藥濃度一樣。因而皮內(nèi)藥物濃度不僅是皮損局部藥效作用重要的定量指標(biāo)，而且是進(jìn)行皮膚藥

2、代動(dòng)力學(xué)研究的關(guān)鍵參數(shù)。以往的研究受研究方法和分析設(shè)備所限，很難準(zhǔn)確測(cè)定局部用藥后的皮內(nèi)藥物濃度。針對(duì)上述情況，首先建立小豬體內(nèi)皮膚微透析(Microdialysis，MD)取樣技術(shù)的動(dòng)物模型，并對(duì)MD技術(shù)中的影響因素進(jìn)行考察；與傳統(tǒng)組織勻漿法相比較，評(píng)價(jià)MD方法用于監(jiān)測(cè)皮內(nèi)藥物濃度的實(shí)用性及替代性；同時(shí)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)皮內(nèi)藥物濃度，對(duì)藥效作用作定量分析；并利用皮膚藥動(dòng)學(xué)對(duì)制劑間生物等效性的應(yīng)用進(jìn)行探索；聯(lián)合體外實(shí)驗(yàn)，觀察藥物的體、內(nèi)外濃度一效

3、應(yīng)(毒性)關(guān)系，使新藥研究及臨床用藥研究水平提升到一個(gè)新的高度。 方法：選用小豬作為微透析模型，用高效液相色譜法(HPIC)測(cè)定相關(guān)樣品中的待測(cè)物濃度，并對(duì)HPIC條件進(jìn)行方法學(xué)考核。Ⅰ：以雷公藤內(nèi)酯醇(T<,0>)為實(shí)驗(yàn)被檢對(duì)象，在小豬為體內(nèi)實(shí)施MD取樣方法，建立模型，并考察實(shí)驗(yàn)的影響因素；Ⅱ：以MD方法連續(xù)、動(dòng)態(tài)測(cè)定為基礎(chǔ)，比較局部使用EMIA和P-L軟膏兩種主藥相同、基質(zhì)成分不同的低共熔局部麻醉制劑后的皮內(nèi)實(shí)時(shí)藥物濃度，評(píng)

4、價(jià)MD技術(shù)在臨床前處方篩選和優(yōu)化研究中的應(yīng)用前景；Ⅲ：通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變效應(yīng)fcytopathic effect，CPE)法體外測(cè)定藥物的細(xì)胞毒性、MD方法監(jiān)測(cè)局部用藥后皮內(nèi)藥物濃度、組織勻漿法測(cè)定局部用藥后皮膚組織藥物濃度、動(dòng)物連續(xù)局部用藥21天后皮膚組織病理學(xué)檢查等步驟，觀察藥物細(xì)胞毒作用的體內(nèi)、體外相關(guān)性和區(qū)別；Ⅳ：用體外溶出度實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定三種生產(chǎn)商不同，但主藥、濃度和劑型都相同的制劑的體外釋放量，再用MD方法監(jiān)測(cè)三種制劑的

5、體內(nèi)藥物經(jīng)皮吸收量，觀察藥物體外釋放和體內(nèi)經(jīng)皮吸收對(duì)皮內(nèi)濃度的影響，進(jìn)而評(píng)價(jià)制劑間的生物等效性；Ⅴ：通過(guò)觀察制劑的體外藥物釋放、體內(nèi)經(jīng)皮吸收和皮膚組織藥物濃度測(cè)定，考察MD方法的局限性。 結(jié)果： Ⅰ：在微透析方法的眾多影響因素中，探針的灌流速度對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大，探針的相對(duì)回收率與灌流速度之間存在反指數(shù)關(guān)系；回收率和溫度之間呈線性正相關(guān)；在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，探針回收率與周圍溶液濃度無(wú)相關(guān)性；對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品雷公藤內(nèi)酯醇而言，不同

6、的回收率測(cè)定方法所得結(jié)果之間無(wú)顯著性差異； Ⅱ：外用實(shí)驗(yàn)制劑P-L軟膏后兩主成分利多卡因和丙胺卡因的經(jīng)皮吸收總量(以AUC<,0-6>為評(píng)價(jià)指標(biāo))分別為EMLA的2.32和2.29倍，而皮內(nèi)藥物達(dá)峰濃度(Cmax)分別為EMLA的2.77和2.64倍。外用EMIA后皮內(nèi)利多卡因和丙胺卡因的濃度分別在2.55h和2.47h達(dá)峰，而外用P-L軟膏后1h左右皮內(nèi)藥物濃度即可以達(dá)到上述水平； Ⅲ：體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用CPE法測(cè)得

7、化合物HB-13對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT株的TC<,50>為24.03μg/mL；用微透析法測(cè)定0.5％HB-13凝膠經(jīng)皮吸收后的皮內(nèi)藥物濃度的結(jié)果表明局部用藥后皮內(nèi)穩(wěn)態(tài)藥物濃度約為2.3μg/mL；勻漿法測(cè)得皮膚組織內(nèi)的藥物濃度平均為26.32μg/mL。在此前提下，延長(zhǎng)給藥時(shí)間至21天后觀察給藥部位皮膚的組織學(xué)變化的結(jié)果表明用藥部位皮膚組織學(xué)無(wú)病理改變； Ⅳ：濃度和劑型相同的三種阿昔洛韋(acyclovir，ACV)乳膏的

8、體外釋放過(guò)程均符合Higuchi動(dòng)力學(xué)方程，累積釋放量Q與時(shí)間的平方根t<'1/2>擬合的線性最好，其中ACV乳膏2的體外釋放量最高，為856.96±56.98μg/cm<'2>，ACV乳膏1次之，為833.22±42.76μg/cm<'2>，ACV乳膏3最低，為637.98±71.8g/cm<'2>；上述三種ACV乳膏外用于局部皮膚后，ACV乳膏1的體內(nèi)經(jīng)皮吸收量最高，ACV乳膏2和ACV乳膏3的體內(nèi)經(jīng)皮吸收量之間無(wú)明顯差異。用ACV

9、乳膏2和3的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行生物等效性評(píng)價(jià)，結(jié)果表明二者生物等效； Ⅴ：以醋酸曲安奈德(triamcinolone acetonide，TAA)為實(shí)驗(yàn)藥的體外實(shí)驗(yàn)中，微透析探針對(duì)TAA的回收率較低，且與傳遞率不相等(平均值分別為13.97％和36.03％)。實(shí)驗(yàn)所用兩種TAA制劑的藥物體外釋放和局部用藥后皮膚組織藥物濃度之間無(wú)明顯差異，用MD方法在透析液中不能檢測(cè)到TAA的藥物濃度。 結(jié)論：在建立MD方法的動(dòng)物模型完成

10、并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化以后，可以用MD方法連續(xù)、微創(chuàng)、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)局部用藥后的皮內(nèi)藥物濃度變化過(guò)程。在此基礎(chǔ)上，可用直接的皮內(nèi)藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)計(jì)算外用制劑的局部藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，進(jìn)而進(jìn)行制劑間生物等效性評(píng)價(jià)。MD方法在外用制劑的局部藥代動(dòng)力學(xué)研究、臨床前處方篩選與優(yōu)化、藥物皮膚毒理濃度探索和外用制劑間生物等效性評(píng)價(jià)方面有良好的應(yīng)用前景。但是，和所有的實(shí)驗(yàn)方法一樣，MD方法也有方法學(xué)本身的局限性。探針對(duì)一部分脂溶性高、藥物蛋白結(jié)合率高和分子量大