參桂益氣溫陽湯治療CITP臨床、相關(guān)免疫學(xué)及轉(zhuǎn)錄因子研究.pdf

1、血小板減少性紫癜原名為“特發(fā)性血小板減少性紫癜（Idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP）”，是一種由于患者體內(nèi)產(chǎn)生抗自身血小板抗體引起血小板破壞增多，從而導(dǎo)致外周血中血小板持續(xù)減少，骨髓巨核細(xì)胞數(shù)正?；蛟龆喟橛谐墒煺系K為特征的出血性疾病。
　　 本研究目的在于探討CITP中醫(yī)辨病辨證治療思路與方案，并驗證參桂益氣溫陽湯治療CITP的臨床療效，補(bǔ)充和豐富CITP中醫(yī)治療思想，為CITP中醫(yī)系統(tǒng)化

2、治療提供參考。探討CITP患者排除激素干擾下免疫功能紊亂狀態(tài)。結(jié)合T-bet/GATA-3、Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)研究，進(jìn)一步闡明療效機(jī)制。
　　 一、臨床療效研究本研究結(jié)果顯示，治療組總病例數(shù)為28例，顯效4例（14.29％）；良效3例（10.74％）；進(jìn)步5例（17.86％）；無效16例（57.14％）；總有效12例；總有效率42.86％。治療前中位P1t計數(shù)23.02±13.69；治療后中位計數(shù)46.18±50

3、.47，治療前后血小板變化具有統(tǒng)計意義（P<0.05）。說明參桂益氣溫陽湯一定程度提高外周血小板水平。后期觀察6個月，顯效病例中1例4個月后plt降至80×109/L，目前波動在80×109/L～90×109/L，余病例病情穩(wěn)定。全部病例觀察期間未出現(xiàn)不適不良反應(yīng)。
　　 二、參桂益氣溫陽湯療效機(jī)理研究治療組符合入組條件CITP病例共25例，男：女=1:1.5，中位年齡35.82±17.70。健康空白對照20例，男：女=1:1.

4、14，中位年齡33.45±15.42。兩組性別比例及中位年齡無明顯差異（P>0.05）。
　　 利用美國BECKMANCOULTER公司流式細(xì)胞儀檢測CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+比例、CD3+CD25+活化T細(xì)胞、CD3+DR+活化T細(xì)胞、CD4+CD25+Treg細(xì)胞、NKT細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD19+B淋巴細(xì)胞、CD19+CD5+淋巴細(xì)胞及Th1/Th2/Th0治

5、療前后表達(dá)變化。
　　 此次淋巴細(xì)胞亞群研究提示，CITP患者機(jī)體免疫紊亂中Treg細(xì)胞和CD19+CD5+細(xì)胞比例下調(diào)及功能缺陷、以及總T細(xì)胞、CTL細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD3DR+活化T細(xì)胞的功能亢進(jìn)是其致病機(jī)制中重要環(huán)節(jié)。治療前后研究提示，參桂益氣溫陽湯通過顯著降低總T細(xì)胞、NKT細(xì)胞、CD3DR+活化T細(xì)胞比值；升高CD19+CD5+/CD19+比值、CD4+CD25+Treg細(xì)胞和Th2細(xì)胞，起到免疫調(diào)節(jié)和免疫耐受作用，

6、有助于改善外周血小板水平。值得注意的是，治療無效組CTL細(xì)胞和CD3+DR+活化T細(xì)胞高表達(dá)，并不因治療干預(yù)而下降，說明CTL細(xì)胞和CD3+DR+活化T細(xì)胞功能增強(qiáng)可能與外周血小板持續(xù)破壞有關(guān)。
　　 經(jīng)SPSSstatistics17.0進(jìn)行多元逐步回歸分析，提示治療前后各項T、B淋巴細(xì)胞亞群與PBC之間無線性相關(guān)性。
　　 三、轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA_3、Foxp3mRNA研究利用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測治療前

7、后轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA+3、Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄水平，探討與Th1、Th2、CD4+CD25+Treg細(xì)胞以及PBC間相關(guān)性。
　　 結(jié)果顯示：治療組治療前GATA-3mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），經(jīng)治療表達(dá)水平顯著下降，治療前后變化具有顯著性差異（P<0.01），治療后與健康對照無統(tǒng)計學(xué)差異。Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄水平治療前與健康對照無差異，治療后Foxp3mRNA表達(dá)顯著低

8、于健康對照，具有顯著性差異（P<0.05）。
　　 治療前GATA-3mRNA轉(zhuǎn)錄水平增強(qiáng)考慮與機(jī)體的基因?qū)用孀陨碚{(diào)控有關(guān)，通過GATA-3mRNA高表達(dá)，使Th平衡向Th2優(yōu)勢漂移，有利于免疫耐受和病情緩解，且隨著治療反應(yīng)和Treg調(diào)節(jié)細(xì)胞的上升而表達(dá)逐漸下降，符合疾病的緩解過程。Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄水平經(jīng)治療有所下降，說明隨著疾病緩解外周Treg調(diào)節(jié)細(xì)胞比例顯著上升和功能增強(qiáng)，負(fù)反饋地調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄水平，使其表達(dá)下調(diào)。證明F

9、oxp3雖然是Treg特異性調(diào)控因子，但也接受Treg的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，這是機(jī)體動態(tài)平衡奧妙所在。
　　 運用SPSSstatistics17.0統(tǒng)計軟件對治療前后轉(zhuǎn)錄因子T-bet與Th1、GATA-3與Th2、Foxp3與Treg細(xì)胞進(jìn)行雙變量相關(guān)分析，結(jié)果顯示各轉(zhuǎn)錄因子與調(diào)控靶細(xì)胞之間無線性相關(guān)性（P>0.05）。
　　 運用SPSS統(tǒng)計軟件對治療前后轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、Foxp3三因素間進(jìn)行雙變量相關(guān)分

10、析。結(jié)果顯示：治療前，T-bet與GATA-3呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），但相關(guān)性不甚密切（相關(guān)系數(shù)<0.5）；與Foxp3呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01，相關(guān)系數(shù)>0.5）。治療后，F(xiàn)oxp3與GATA-3之間呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系（P<0.05），相關(guān)系數(shù)為0.427。提示CITP慢性期Foxp3、GATA-3和T-bet之間存在相互制約關(guān)系，這符合CITP疾病狀態(tài)及各轉(zhuǎn)錄因子的功能。緩解期Foxp3和GATA-3轉(zhuǎn)錄相伴降低，說明隨著外周Tre

11、g調(diào)節(jié)細(xì)胞的恢復(fù)和功能增強(qiáng)，通過負(fù)反饋機(jī)制降低了Foxp3和GATA-3轉(zhuǎn)錄水平。
　　 運用SPSSstatistics17.0多元逐步回歸分析進(jìn)一步探討轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3、Foxp3表達(dá)與PBC之間相關(guān)性。結(jié)果顯示，治療后GATA-3與PBC呈負(fù)相關(guān)，P=0.032（P<0.05），得出方程式plt=90.299-64.086gata。說明疾病緩解，外周血小板上升與GATA-3轉(zhuǎn)錄水平下降有一定相關(guān)性。

12、　　 本研究尚存在不足之處。一、轉(zhuǎn)錄因子及淋巴細(xì)胞亞群為敏感性實驗指標(biāo)，隨著疾病狀態(tài)變化而波動，本實驗觀察期4～5個月，只是抽取治療前后血樣作為研究指標(biāo)，有可能丟失了動態(tài)變化過程，不利于全面客觀地闡述致病機(jī)理。本研究不排除錯過了捕捉和研究轉(zhuǎn)錄因子動態(tài)變化的機(jī)會。二、治療有效病例數(shù)有限，相對影響了療效機(jī)理研究的客觀性，難免存在統(tǒng)計誤差。
　　 本研究提示CITP疾病未緩解狀態(tài)與CD3+CD8+CTL細(xì)胞和CD3+DR+活化T細(xì)胞