尿絨毛膜酶試劑盒的研制及在糖尿病腎病早期診斷中的價值.pdf

1、背景和目的： 腎臟疾患是一類危害人民健康的重要疾患，然而，腎臟損害的早期檢測是臨床檢驗的薄弱環(huán)節(jié)，是目前人們研究的熱點之一。 近年來，尿酶的檢測越來越引起人們的重視，腎小管刷狀緣面向腎小管管腔，是重吸收和物質代謝很活躍的部位，對缺血、缺氧和氧自由基等有害刺激十分敏感。當存在腎臟損害的因素時，首先對外界刺激進行迅速生物反應的是腎小管刷狀緣，導致位于刷狀緣的酶在尿中排出增多，尿刷狀緣酶（又稱絨毛膜酶）包括堿性磷酸酶（ALP）

2、與亮氨酸氨基肽酶（LAP）。ALP與LAP在尿中排出增多能較早的反映出腎小管損害，也可在一定程度上及早的提示腎小球的損害。但尿酶的檢測方法目前僅限于一般化學方法，這類方法敏感性低、特異性差，不適宜臨床常規(guī)檢測，迫切需要一種簡單易行、更為科學的診斷方法，研制出尿絨毛膜酶試劑盒正是本課題的目的。 大量的流行病學資料和臨床研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病腎?。―N）是糖尿病的嚴重并發(fā)癥，已成為慢性腎功能衰竭的主要原因之一。將制備的尿酶試劑盒應用于DN

3、的早期診斷，并初步制定出ALP與LAP參考值范圍。 研究方法： ①分離純化尿中絨毛膜包囊，制備尿絨毛膜包囊抗體，研究尿絨毛膜酶的存在形式；②設計一種免疫測定方法，將制備的抗體純化后包被酶標板，研制出具有較高敏感性和特異性的尿絨毛膜酶（又稱刷狀緣酶）檢測試劑盒；③將采集到的標本按照病程分為A（病程≤3年）、B（病程在3年與10年之間）、C（病程≥10年）三組，對每組的尿絨毛膜酶進行檢測，與正常對照組相比，并用尿N-乙酰-β

4、-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）做對照，將對照組ALP和LAP的均數(shù)+2倍標準差作為正常值的上限，與尿蛋白定性進行異常發(fā)生率的比較。應用方差分析、Q檢驗、卡方檢驗進行統(tǒng)計分析，P＜0.05為有顯著性差異。 結果： 1、尿ALP以0.18U/L為上界值，尿LAP以1.74U/L為上界值，其診斷糖尿病腎功能損害的敏感性為95.31％，診斷特異性為89.47％，符合免疫試劑盒的基本要求。 2、糖尿病各組的尿絨毛膜酶均顯著

5、高于正常對照組，P＜0.05，與尿NAG的結果相同。 3、糖尿病各組中尿絨毛膜酶的異常發(fā)生率均顯著高于尿蛋白定性的異常發(fā)生率，P＜0.05，而尿絨毛膜酶的異常發(fā)生率與尿NAG的異常發(fā)生率無明顯差異，P＞0.05。 結論： 1、尿絨毛膜酶在尿中的存在形式為細胞膜包囊，典型的脂質雙分子層； 2、尿ALP＞0.18U/L，LAP＞1.74U/L者可認為糖尿病患者有腎功能的損害； 3、尿絨毛膜酶能及早反映