高效毛細(xì)管電泳分析乳鐵蛋白的方法研究.pdf

1、本論文分別利用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)及高效液相色譜技術(shù)對(duì)乳制品中低含量乳鐵蛋白、果醬中痕量納他霉素的測(cè)定方法進(jìn)行了研究，本論文分如下4個(gè)部分: (1)建立了高效毛細(xì)管電泳在酸性分離體系下測(cè)定高含量乳鐵蛋白的新方法。以37cm×100μm i.d毛細(xì)管為分離柱，35mmol/L磷酸和14g/L聚氧化乙烯300000(PEO)(1mo/L CsOH調(diào)pH 2.50)為分離緩沖液，0.05 mol/L磷酸二氫鈉(1mol/L磷酸調(diào)pH 2

2、.20)為樣品緩沖液，檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。在50～300mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9986，檢出限和定量限分別為10mg/L和50mg/L。由于提取后的樣品必須用水稀釋10倍后才能進(jìn)樣，因此，該法僅適合于乳鐵蛋白片劑及原料等樣品中高含量乳鐵蛋白的測(cè)定。 (2)建立了高效毛細(xì)管電泳在堿性分離體系下測(cè)定高含量乳鐵蛋白的新方法。以77cm×100μm i.d.毛細(xì)管為分離柱，以0.1m

3、ol/L硼酸，0.01mol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)和8g/L羥乙基纖維素(HEC)(1mol/L CsOH調(diào)pH8.80)為分離緩沖液，以15mmol/L硼酸和20mmol/LSDS為樣品提取介質(zhì)(0.25mol/L LiOH調(diào)pH8.60)，分離電壓30kV，檢測(cè)波長(zhǎng)214nm。在10～1000mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993，檢出限和定量限分別為3mg/L和10mg/L。由于在

4、目前的分離條件下，不能實(shí)現(xiàn)低含量乳鐵蛋白與乳制品中主要的乳清蛋白的分離，因而該法僅適于乳鐵蛋白片劑及原料等基體簡(jiǎn)單的樣品中乳鐵蛋白的測(cè)定。 (3)建立了高效毛細(xì)管電泳在堿性分離體系下測(cè)定低含量乳鐵蛋白的新方法。以57cm×50μm i.d.毛細(xì)管為分離柱，0.3mol/L硼酸，20mmol/LSDS和8g/L HEC為分離緩沖液(pH=8.80)，以0.05mol/L醋酸為樣品提取介質(zhì)，離心后取上清液直接進(jìn)樣測(cè)定。分離溫度25℃

5、，分離電壓20kV，在214nm處對(duì)含有乳鐵蛋白的乳制品進(jìn)行檢測(cè)。在50～800mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，檢出限和定量限分別為15mg/L和50mg/L。本方法進(jìn)一步拓寬了堿性體系下高效毛細(xì)管電泳測(cè)定乳鐵蛋白的適用范圍。適于嬰兒配方奶粉、保健食品中低含量乳鐵蛋白的測(cè)定。 (4)建立了高效液相色譜測(cè)定果醬中殘留納他霉素的新方法。果醬經(jīng)甲醇-水-冰乙酸(體積比為20:80:10)提取溶劑提取。采用Hyp

6、ersil ODS2C18(200mm×4.0mm i.d.，5.0μm)色譜柱，甲醇-0.75％磷酸水溶液(體積比為75:25)為流動(dòng)相，流速為1.00mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm。在0.5～100mg/kg范圍內(nèi)，納他霉素在果醬中含量與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9999)，加標(biāo)回收率為93.14％～98.24％(n=6)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.72％～1.49％，在番茄醬和草莓醬樣品中其檢出限分別為0.06mg/