游離型腰椎間盤突出組織的來源及其與VEGF表達(dá)的相關(guān)性.pdf

1、本文研究目的：觀察不同來源游離型腰椎間盤突出組織內(nèi)的VEGF表達(dá)，分析VEGF表達(dá)與突出組織血管化及巨噬細(xì)胞浸潤的相關(guān)性，揭示游離型突出組織發(fā)生自然吸收的機(jī)制及其規(guī)律。 研究材料和方法： 1、臨床資料本組共37例，所有患者術(shù)前均行X線、CT掃描以及MRI檢查，并經(jīng)術(shù)中所見證實(shí)為游離型腰椎間盤突出(后縱韌帶破裂、突出組織與來源椎間盤分離)。其中男20例，女17例；年齡35～76歲，平均49.7歲；突出節(jié)段L4～519例，L

2、5～S117例，L3～41例；術(shù)前病程(腰痛或/和腿痛加重至手術(shù)的時間)2～192周，平均36.8周。 2、組織學(xué)方法本組共39個游離突出組織(其中2例含2個突出組織)。所有標(biāo)本以體積分?jǐn)?shù)為4％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚5μm，分別用于常規(guī)HE染色、免疫組化研究。 1)、HE染色：觀察突出組織的病理來源，其判斷標(biāo)準(zhǔn)為：纖維環(huán)組織為排列有序的膠原纖維組成，其外周主要為纖維母細(xì)胞，與髓核移行區(qū)可見較多的軟骨樣細(xì)胞；髓

3、核組織由疏松的、排列無序的膠原纖維組織組成，可見軟骨細(xì)胞散在分布于其間；終板組織則較易鑒別，含有特征性的透明軟骨細(xì)胞。2)、免疫組化研究：單克隆抗體CD68(美國Sigma公司)，為抗巨噬細(xì)胞特異性抗體，用于觀察突出組織巨噬細(xì)胞浸潤程度。單克隆抗體CD34(美國Sigma公司)，為抗血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗體，觀察突出組織新生血管形成程度。單克隆抗體VEGF(美國Sigma公司)，抗VEGF抗體，用于觀察突出組織內(nèi)的VEGF表達(dá)。

4、3、圖像學(xué)處理及方法： 1)、將HE染色圖像(4×10)輸入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用Osiris軟件(Version4.09日內(nèi)瓦大學(xué))測量新生肉芽組織長入至突出組織邊緣的最大垂直距離，以此作為肉芽組織長入深度。 2)、分別計(jì)算10個高倍鏡視野下(40×10)的CD34、CD68、VEGF陽染細(xì)胞平均值，并以此分別代表突出組織新生血管數(shù)量、巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量、VEGF陽染細(xì)胞數(shù)量。 3)、計(jì)算新生血管形成程度、巨噬細(xì)胞浸潤程度

5、以及VEGF表達(dá)程度：由于組織的自然吸收程度與新生血管形成、巨噬細(xì)胞的浸潤程度有關(guān)，因此我們以新生血管形成程度、巨噬細(xì)胞浸潤程度代表組織的自然吸收程度，計(jì)算方法如下：新生血管形成程度=肉芽組織長入深度×新生血管數(shù)量；巨噬細(xì)胞浸潤程度=肉芽組織長入深度×巨噬細(xì)胞浸潤數(shù)量；VEGF表達(dá)程度=肉芽組織長入深度×VEGF陽染細(xì)胞數(shù)量。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0軟件行單因素方差分析或直線相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有顯

6、著性意義。 研究結(jié)果： 1、突出組織的組織學(xué)來源87％的突出組織含有不同程度的髓核成分，其中以髓核為主的占62％(24/39)；67％的突出組織中含有不同程度的終板組織，其中以終板為主的占31％(12/39)；38％的突出組織中含有纖維環(huán)組織，且這些纖維環(huán)組織均來自于內(nèi)層移行區(qū)，其中以纖維環(huán)為主的僅占7％(3/39)，無1例只來源于纖維環(huán)組織。 2、突出組織的病理學(xué)改變本組92％的突出組織內(nèi)可見以新生血管形成、炎

7、癥細(xì)胞浸潤為特征的肉芽組織形成，新生的肉芽組織大多位于突出組織的外周，少數(shù)可見新生肉芽組織貫穿整個突出組織。新生血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)免疫組化CD34染色進(jìn)一步證實(shí)。在新生血管周圍，可見大量的細(xì)胞浸潤，多呈CD68染色陽性，證實(shí)為巨噬細(xì)胞來源。在新生的肉芽組織中，可見大量紡錘狀細(xì)胞內(nèi)VEGF表達(dá)，該紡錘狀細(xì)胞多呈CD68染色陽性。 3、VEGF表達(dá)程度與新生血管形成程度、巨噬細(xì)胞浸潤程度間的相關(guān)性直線相關(guān)分析顯示，在新生肉芽組織中，新生

8、血管形成程度與巨噬細(xì)胞浸潤程度呈顯著正相關(guān)(r=0.371，p=0.020)；VEGF表達(dá)程度與新生血管形成程度、巨噬細(xì)胞浸潤程度也均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.342，p=0.033；r=0.440，p=0.005)。 4、突出組織的來源與VEGF表達(dá)的相關(guān)性新生肉芽組織形成在髓核組織周圍較為明顯，纖維環(huán)周圍次之，而終板周圍則少見新生肉芽組織形成;在同一患者的同一突出組織或不同突出組織中，上述現(xiàn)象同樣存在。因此，我們推測，突出組

9、織的組織學(xué)來源可能是決定其周圍新生肉芽組織形成程度的重要因素之一，其中髓核成分是主要決定因素。根據(jù)突出組織中髓核的含量，我們將突出組織分為三組：髓核組——突出組織為髓核或以髓核為主；含髓核組——突出組織中含髓核，但不是主要成分;不含髓核組——突出組織中不含髓核組織。三組間新生血管形成程度、巨噬細(xì)胞浸潤程度以及VEGF表達(dá)程度差異均有顯著性意義(F=5.663，p=0.008；F=3.604，p=0.038；F=4.¨0，p=0.025)