羅格列酮對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞VEGF、AKT-,1-2-、P-AKT-,1-蛋白表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高且難以治愈，病程進(jìn)展迅速，易侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率高。隨著醫(yī)療技術(shù)和醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的發(fā)展，對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷及治療技術(shù)已經(jīng)有了很大的提高。但是關(guān)于肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的確切機(jī)制還不清楚，目前仍然沒有有效的預(yù)防措施，因此深入地研究肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)理以及探討新的預(yù)防及治療措施具有極其重要的臨床意義。 過氧化物酶體增殖物激活受體(Per

2、oxisome proliferator-activated receptors，PPARs)是甾體激素受體超家族的新成員，PPARs共有3個(gè)亞型即PPARα、PPARβ、PPARγ，它們在結(jié)構(gòu)、功能及組織分布上均有差異。PPARs的生物學(xué)功能復(fù)雜，參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝與糖代謝、脂肪細(xì)胞分化和能量平衡、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化及腫瘤細(xì)胞的分化與凋亡等生理和病理過程。近年來的許多研究表明PPARγ在多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，通過多種途徑抑制細(xì)胞增

3、殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及分化、抑制血管生成和降低腫瘤侵襲能力等。 PPARγ的配體包括天然型配體和合成型配體兩類。前者由實(shí)驗(yàn)證實(shí)從前列腺素D2衍生出的一系列前列腺素代謝產(chǎn)物是PPARγ的天然配體，其中15-脫氧前列腺J2(15d-PGJ2)與PPARγ的結(jié)合作用最強(qiáng)。合成型配體主要是胰島素增敏劑噻唑烷二酮類化合物(Thiazolidinediones，TZDs)，包括羅格列酮(Rosiglitazone，Rosi)、匹格列酮(piog

4、litazone)、曲格列酮(troglitazone)等，臨床上主要用于II型糖尿病的治療。 國外的一些實(shí)驗(yàn)證明PPARγ激動(dòng)劑可以有效地預(yù)防腫瘤的發(fā)生，有望在腫瘤的化學(xué)預(yù)防中發(fā)揮重要作用。羅格列酮是噻唑烷二酮類藥物中生物利用度最高藥效最強(qiáng)的一種藥物，且其毒副作用相對(duì)較小。我們以前的試驗(yàn)結(jié)果表明羅格列酮可以顯著抑制肝癌SMMC-7721細(xì)胞的生長并且誘導(dǎo)凋亡。本試驗(yàn)通過研究羅格列酮對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721中VEGF、AKT

5、1/2及P-AKT1表達(dá)的影響，探討PPARy抑制肝癌SMMC-7721細(xì)胞生長的可能作用機(jī)制。 方法：1 SMMC-7721細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，取培養(yǎng)48小時(shí)的細(xì)胞加入羅格列酮分0.1、1、10、100μmol/L4個(gè)濃度組，以及選取加入10μmol/L藥物的細(xì)胞取24h、48h、72h三個(gè)作用時(shí)間，采用Western Blot法進(jìn)行檢測，觀察羅格列酮的對(duì)SMMC-7721細(xì)胞中VEGF基因表達(dá)的影響來探討羅格列酮對(duì)肝細(xì)胞癌血管生成

6、影響的可能作用機(jī)制。 2.SMMC-7721細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，取培養(yǎng)48小時(shí)的細(xì)胞加入羅格列酮分1、10、100μmol/L3個(gè)濃度組，以及選取加入10μmol/L，藥物的細(xì)胞取0.5h、1h、2h、6h四個(gè)作用時(shí)間，采用Western Blot法進(jìn)行檢測，觀察羅格列酮對(duì)SMMC-7721細(xì)胞中AKT1/2、P-AKT1基因表達(dá)的影響來探討羅格列酮對(duì)肝細(xì)胞癌的抑制作用是否與P13K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。應(yīng)用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)光密

7、度研究有無量效及時(shí)效關(guān)系。 結(jié)果：1 羅格列酮可以顯著降低SMMC-7721細(xì)胞株中VEGF蛋白的表達(dá)，并呈顯著的時(shí)間依賴性和劑量依賴性變化(P<0.05)。 2.羅格列酮對(duì)SMMC-7721細(xì)胞株中AKT1/2、P-AKT1蛋白的表達(dá)無顯著影響，表現(xiàn)在PVDF膜上顯示條帶亮度及寬度無明顯變化(P>0.05)。 結(jié)論：1 羅格列酮可以顯著降低SMMC-7721細(xì)胞株中VEGF蛋白的表達(dá)，并且呈顯著的時(shí)間依賴性和劑