microRNA-124a在大鼠損傷脊髓中的表達(dá)及與鈣蛋白酶1的相關(guān)分析.pdf

1、【目的】:
　　觀察并分析大鼠急性脊髓損傷后microRNA-124a(miRNA-124a)和鈣蛋白酶1(calpain1)基因表達(dá)變化及二者間的關(guān)系,為探尋脊髓損傷潛在的干預(yù)靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　【方法】:
　　采用改良Allen,s法建立大鼠急性脊髓損傷模型;將108只大鼠隨機(jī)分為無(wú)脊髓損傷組(A組、對(duì)照組,18只)、脊髓損傷組(B組、實(shí)驗(yàn)組、SCI組,包括SCI后6h、12h、24h、3d、7d組,每組18只

2、);各組分別于相應(yīng)實(shí)相行BBB評(píng)分評(píng)價(jià)神經(jīng)功能、HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及原位雜交檢測(cè)miRNA-124a和calpain1基因表達(dá)。
　　【結(jié)果】:
　　1、BBB評(píng)分:各損傷組較對(duì)照組BBB評(píng)分明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、HE染色:正常脊髓組織神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)正常;損傷后6h脊髓組織出現(xiàn)廣泛水腫;12-24h后發(fā)展為壞死組織,急性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)播散到灰質(zhì);損傷后24h-7d,血管通透性

3、增加,神經(jīng)細(xì)胞廣泛溶解、壞死,并有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR:各損傷組脊髓組織中miRNA-124a的表達(dá)均降低,與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);脊髓損傷后calpain1表達(dá)逐漸增高,24h時(shí)達(dá)到高峰,隨之下降,至3d時(shí)表達(dá)仍高于A組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),7d時(shí)calpain1不表達(dá)或低表達(dá),與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。急性脊髓損傷后miRNA-124a、c

4、alpain1兩種基因的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.89)。
　　4、原位雜交:miRNA-124a、calpain1mRNA主要表達(dá)于大鼠脊髓腹角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元,二者的細(xì)胞內(nèi)定位為胞漿染色。miRNA-124a主要表達(dá)于對(duì)照組及脊髓損傷后7d組,而calpain1mRNA主要表達(dá)于脊髓損傷后6h、12h、24h、3d組。
　　【結(jié)論】:
　　脊髓損傷后miRNA-124a基因表達(dá)顯著降低,而calpain1的表達(dá)明顯上調(diào)