不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)患者外周血中CD94、CD56、IL-15含量變化及其相關(guān)性研究.pdf

1、目的：免疫學(xué)研究認(rèn)為，妊娠是一種同種異體移植現(xiàn)象，流產(chǎn)是移植物被排斥的結(jié)果。在正常妊娠過(guò)程中，胚胎作為一種半同種異體組織抗原卻不受母體排斥而存活，這與母體內(nèi)的免疫微環(huán)境保持平衡有著很大的關(guān)系。反復(fù)自然流產(chǎn)(recurrentspontaneousabortion，RSA)是妊娠期常見(jiàn)并發(fā)癥，其發(fā)生率約占妊娠總數(shù)的1.0％，占自然流產(chǎn)數(shù)的15％。RSA的病因涉及遺傳基因缺陷、母體的全身性疾病、生殖器官畸形、內(nèi)分泌功能失調(diào)、胎盤功能不足、感

2、染及胚胎畸形等因素，但40-60％原因不明，稱為不明原因反復(fù)自然流產(chǎn)(unexplainedRSA，uRSA)。近年來(lái)的研究表明，人類自然殺傷細(xì)胞(Naturalkillercell，NK)在機(jī)體的免疫調(diào)控中起重要作用，NK細(xì)胞功能失衡與RSA關(guān)系密切。本課題旨在研究原因不明RSA患者外周血中NK細(xì)胞表面抗原標(biāo)志CD94、CD56和NK細(xì)胞調(diào)節(jié)因子IL-15的含量變化及其相關(guān)性，探討CD94、CD56和IL-15在原因不明RSA發(fā)病中的

3、作用。 方法：資料來(lái)源：選自在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科門診和計(jì)劃生育實(shí)驗(yàn)室就診患者。RSA組：30例，自然流產(chǎn)次數(shù)≥3次，排除染色體、解剖、內(nèi)分泌異常、感染及自身免疫性疾病，所有病例均于門診就診時(shí)抽取外周靜脈血。RSA已孕組：15例，既往有過(guò)2次及以上的自然流產(chǎn)史，并且本次妊娠已經(jīng)確診為胚胎停育或難免流產(chǎn)。于清宮手術(shù)前抽取外周靜脈血。正常妊娠組：15例，為孕37-57天要求人工流產(chǎn)術(shù)的正常妊娠婦女，既往無(wú)不良孕產(chǎn)史及上述疾病史

4、，人流前均做B超證實(shí)為宮內(nèi)孕單活胎，無(wú)任何流產(chǎn)跡象，于清宮手術(shù)前抽取外周靜脈血。正常非孕組：15例，為要求放置宮內(nèi)節(jié)育器的正常非妊娠婦女，既往均有正常分娩史，無(wú)自然流產(chǎn)史、死胎或死產(chǎn)史，也無(wú)上述疾病史，于上環(huán)前抽取外周靜脈血。各組均抽取前臂肘靜脈血4ml，其中2ml置于含有EDTAK2抗凝劑的無(wú)菌試管中，8小時(shí)內(nèi)送流式檢測(cè)；其余2ml置于無(wú)菌不含抗凝劑的試管中，室溫下待其自然凝固，2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上層血清置于另一個(gè)試管中

5、，置-20℃冰箱待測(cè)。采用流式細(xì)胞分析方法檢測(cè)四組研究對(duì)象外周血中CD94、CD56陽(yáng)性細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)，CD56陽(yáng)性細(xì)胞中CD56bright、CD56dim所占百分?jǐn)?shù)。流式上機(jī)分析采用Cellquest軟件每個(gè)標(biāo)本攝取10000個(gè)細(xì)胞，以FSC/SSC設(shè)門，圈定淋巴細(xì)胞群進(jìn)行分析，結(jié)果由該軟件自動(dòng)統(tǒng)計(jì)。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)四組研究對(duì)象血清中IL-15的含量。由全自動(dòng)酶標(biāo)儀在450nm處讀出OD值，酶標(biāo)儀可自動(dòng)將OD值轉(zhuǎn)

6、換為濃度。 結(jié)果：1.RSA未孕組外周血中CD94的水平(21.72±6.73)％較正常非孕組婦女(26.06±2.50)％有明顯降低(P＜0.05)。CD56和IL-15的水平分別為(24.93±5.96)％和(86.48±28.89)pg/ml，高于正常非孕組(17.50±2.44)％、(60.01±20.26)pg/ml(P＜0.05)。CD56bright和CD56dim的水平與正常非孕組比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05

7、)。2.RSA已孕組外周血中CD94水平(21.30±3.38)％和CD56bright水平(64.63±11.28)％比正常妊娠組(26.97±3.23)％和(74.65±5.12)％低(P＜0.05)。CD56、CD56dim和IL-15的水平(25.81±4.92)％、(36.03±11.10)％和(104.27±24.73)pg/ml，比正常妊娠組(21.23±3.17)％、(25.35±5.12)％和(70.44±26.99)

8、pg/ml高(P＜0.05)。3.正常妊娠組外周血中CD56的水平(21.23±3.17)％和CD56dim的水平(25.35±5.12)％較正常非孕組的(17.50±2.44)％和(18.06±3.51)％顯著升高(P＜0.05)。CD56bright的水平(74.65±5.12)％較正常非孕組的(81.94±3.51)％顯著降低(P＜0.01)。CD94和IL-15的水平與正常非孕組比較，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。4.直線相關(guān)分

9、析：RSA未孕組外周血中CD94與CD56和CD56bright呈正相關(guān)，與CD56dim呈負(fù)相關(guān)P＜0.05。 結(jié)論：正常妊娠時(shí)外周血中CD56+細(xì)胞增多，其中CD56dim細(xì)胞增多而CD56bright細(xì)胞減少，這可能提示妊娠時(shí)胚胎需要CD56dim細(xì)胞為其掃清障礙。原因不明RSA患者外周血中CD56dim和IL-15的表達(dá)升高，CD94和CD56bright的表達(dá)降低與RSA的發(fā)病有關(guān)。RSA未孕組患者外周靜脈血中CD94