系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血CD3+CD56+自然殺傷樣T細胞體外活化特性研究.pdf

1、背景:CD3+CD56+NKT樣細胞是一種能同時表達T細胞與NK細胞的表面標(biāo)志,兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞非主要組織相容性(Major Histocompatibility Complex,MHC)殺瘤特點,被認為是增殖速度最快、殺瘤活性最強、殺病譜最廣的免疫活性細胞。其可以在體外用多種細胞因子共同培養(yǎng)后獲得的一群異質(zhì)免疫活性細胞,又被稱為多種細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(Cytokine Induced Killer,CIK)

2、,在腫瘤患者外周血體外活化及過繼免疫治療中具有廣泛的作用。NKT樣細胞不僅是一種高效的免疫效應(yīng)細胞,可以在體外直接殺傷腫瘤細胞,同時也是一種免疫抑制性調(diào)節(jié)細胞,在機體的免疫自穩(wěn)、抗感染和抗腫瘤以及移植免疫等方面發(fā)揮重要作用。為了揭示其在自身免疫性疾病中的生物學(xué)作用,通過不同體外刺激方法,來闡明其對體外刺激的敏感性以及在調(diào)節(jié)炎癥免疫中的作用方式,進而為其在自身免疫性疾病中發(fā)揮更大的生物學(xué)活性提供實驗依據(jù)。
　　目的:通過檢測系統(tǒng)性紅

3、斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)患者外周血CD3+CD56+自然殺傷樣T(NKT樣)細胞的表達以及體外活化后的增殖情況和Th1型細胞因子干擾素γ(IFN-γ)和Th2型細胞因子白介素-4(IL-4)的表達,來探討其在SLE中免疫調(diào)節(jié)方式及生物學(xué)作用。
　　方法:收集2010年3月-7月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院SLE患者30例和門診體檢的年齡、性別與患者相匹配的健康對照組20

4、例,且SLE患者按照疾病活動與疾病穩(wěn)定分組。提取SLE患者及健康對照組外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),分別經(jīng)佛波酯(Phorbol12-myristate13-acetate,PMA)和離子霉素(Ionomycin)非特異性刺激以及抗CD3單克隆抗體(CD3mAb)和白介素-2(IL-2)的特異性刺激,利用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測CD3+CD

5、56+NKT樣細胞刺激前后的表達,以及細胞刺激活化后Th1型細胞因子IFN-γ和Th2型細胞因子IL-4的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.SLE患者外周血中CD3+CD56+NKT樣細胞占淋巴細胞百分比顯著低于正常對照組(1.45±0.37vs2.81±0.52),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),而SLE疾病穩(wěn)定組和疾病活動組之間沒有顯著性差異(1.53±0.44vs1.41±0.33,P>0.05)。
　　2.SL

6、E患者與正常對照組外周血中CD3+CD56+NKT樣細胞數(shù)量經(jīng)兩種方法刺激活化后表達均顯著提高,與活化前相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),與佛波酯(PMA)和離子霉素(Ionomycin)的非特異性刺激相比,經(jīng)抗CD3單克隆抗體(CD3mAb)和白介素-2(IL-2)的特異性刺激后NKT樣細胞增殖能力更強,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),而且經(jīng)CD3mAb和IL-2特異性刺激后,正常對照組NKT樣細胞增殖能力要強于SLE組,差異有

7、統(tǒng)計學(xué)意義(16.73±2.44倍vs13.78±1.87倍,P<0.05)。
　　3.經(jīng)抗CD3mAb+IL-2特異性刺激和PMA+Ionomycin的非特異性刺激后SLE患者與正常對照組外周血中CD3+CD56+NKT樣細胞Th1型細胞因子IFN-γ的表達均顯著高于刺激活化前,刺激活化后SLE組中表達IFN-γ的細胞要高于正常對照組,且經(jīng)特異性刺激后SLE患者與正常對照組外周血中CD3+CD56+NKT樣細胞Th1型細胞因子I

8、FN-γ的表達顯著高于非特異性刺激,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),而兩組中Th2型細胞因子IL-4在兩種方法刺激下均幾乎不表達。
　　結(jié)論:
　　1.SLE患者外周血中CD3+CD56+NKT樣細胞表達比正常人明顯減少,而且經(jīng)細胞因子誘導(dǎo)刺激也沒有正常對照組擴增快,說明NKT樣細胞與SLE發(fā)生存在密切聯(lián)系,而且其功能異?？赡芘cSLE病情發(fā)展相關(guān)。
　　2.CD3+CD56+NKT樣細胞能夠在體外被抗CD3mAb和I