黃芩苷對(duì)HL-60細(xì)胞增殖、凋亡、分化的影響及其作用機(jī)制的探討.pdf

1、目的①研究中藥黃芩苷(Baicalin)對(duì)人髓系白血病細(xì)胞株HL-60細(xì)胞增殖、凋亡、分化的影響。②觀察黃芩苷對(duì)乩一60細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平的影響，探討其作用機(jī)制。③黃芩苷對(duì)HL-60細(xì)胞作用后PI-3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)的變化。 方法應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)、細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察黃芩苷對(duì)乩一60細(xì)胞增殖的影響；DNA倍體分析、AnnexinV／PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)、末端缺口原位標(biāo)記(TUNEL)

2、法及DNA凝膠電泳分析細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期變化；NBT還原實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞表面CDllb、CD33抗原檢測(cè)黃芩苷誘導(dǎo)乩一60細(xì)胞分化能力；RT-PCR檢測(cè)黃芩苷作用前后c—myc、bcl-2、h—TERT、pim-2、P21、Mcl-1基因mRNA表達(dá)水平的變化，蛋白印跡法(Western—Blot)檢測(cè)c-myc、bcl-2、h—TERT和caspase一3蛋白以及Akt、mTOR和NF-κB蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)及克

3、隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果示黃芩苷能明顯抑制HL-60細(xì)胞增殖，半數(shù)抑制濃度(Iao)約為20μmol幾;DNA片段化、亞G1峰(凋亡峰)、TUNEL凋亡細(xì)胞的檢出及AnnexinV／PI雙染流式細(xì)胞檢測(cè)等證實(shí)黃芩苷能有效誘導(dǎo)乩一60細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡率在一定的藥物濃度范圍內(nèi)(10～40μmol／L)與藥物作用濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)。NBT還原實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞表面CDllb、CD33抗原檢測(cè)結(jié)果提示黃芩苷能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化成熟。黃芩苷作用后乩一60

4、細(xì)胞c—myc、bcl一2、h—TERT基因mRNA表達(dá)隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸減少；P21、Mci一1基因mRNA表達(dá)隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高；而pim一2基因mRNA的表達(dá)水平則無(wú)明顯變化。Western-Blot的結(jié)果顯示c—myc、bcl-2、h—TERT、Akt、mTOR和NF-KB蛋白的表達(dá)水平均下降，并且隨作用時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)下降更明顯，而caspase-3蛋白表達(dá)則隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高。 結(jié)論黃芩苷能有效抑