TGF-β-,1-及其異構體對HL-60細胞增殖的作用與機制研究.pdf

1、轉化生長因子-β(TGF-β)家族是一類結構相關、生物學活性相近的多肽。在造血調控方面，主要發(fā)揮負性調控作用，與正性細胞因子一起維持著造血細胞增殖和分化的平衡。在這個家族中有30多個成員，人體內只存在有TGF-β<,1>、TGF-β<,2>、TGF-β<,3>三種異構體，在調控細胞生長和分化方面具有不同的作用。TGF-β<,1>對白血病細胞有直接的抑制作用，而對于TGF-β<,1>的異構體-TGF-β<,2>、TGF-β<,3>對白血病

2、細胞的作用研究國內外還未見報道。有關它們在白血病細胞中的表達情況未見系統(tǒng)報道。這三種異構體之間是否存在某種關聯(lián)目前也尚不清楚。ATRA和ATO是我國學者發(fā)現(xiàn)的治療急性早幼粒細胞白血病的有效藥物。有關內源性細胞因子，特別是TGF-β<,1>是否參與了ATRA和ATO對白血病細胞的作用機制的報道也很少。 1．以HL-60細胞為研究對象，應用生長曲線、MTT法、集落形成抑制試驗、NBT還原試驗、DNA ladder、流式細胞術等方法探

3、討TGF-β<,1>、TGF-β<,2>、TGF-β<,3>對白血病細胞分化和凋亡的影響；采用半定量RT-PCR方法研究這三種異構體對bcl-2、c-myc、fas、bax等凋亡相關基因表達的調控。 2．應用實時定量RT-PCR和ELISA方法研究白血病細胞及血細胞分化各階段TGF-β<,1>及其異構體的表達及其意義； 3．構建針對不同靶位點的TGF-β<,1> RNAi質粒，應用實時定量RT-PCR和ELISA方法鑒定

4、基因沉寂效果及TGF-β<,1>表達被抑制后其異構體表達的變化。應用NBT還原試驗、流式細胞術等方法研究ATRA、ATO對采用siRNA方法抑制TGF-β<, 1>表達的HL-60細胞的作用。 取得了以下主要結果及結論： 1．TGF-β<,1>、TGF-β<,2>、TGF-β<,3>對HL-60細胞的增殖均有抑制作用，這種抑制作用具有劑量依賴性，其中TGF-β<,1>的抑制作用最強。在低濃度下，TGF-β<,1>可誘導H

5、L-60細胞出現(xiàn)分化，而TGF-β<,2>、TGF-β<,3>誘導分化的作用不如前兩者明顯。在高濃度下，三者均可誘導HL-60細胞出現(xiàn)一定程度的凋亡，也TGF-β<,1>的作用最明顯。它們可能通過調控凋亡相關基因來誘導HL-60細胞凋亡。對凋亡相關基因表達的調控程度不同可能是這三種異構體對HL-60細胞的抑制作用強度不同的原因之一。 2．CD<,34><'+>細胞、BMNC、PLT、AL細胞、CML細胞均表達TGF-β<,1>、

6、TGF-β<,2>、TGF-β<,3>，其中越是成熟的細胞，TGF-β<,1>的表達水平越高；提示內源性TGF-β<,1>在血細胞的成熟分化過程中可能起著重要的作用，其表達水平的降低在白血病的發(fā)病機制中起重要作用。TGF-β<,2>、TGF-β<,3>的表達水平在正常血細胞中的表達沒有這種趨勢，提示TGF-β<,2>、TGF-β<,3>在正常血細胞成熟分化過程中表現(xiàn)不活躍。CML細胞的TGF-β<,1>、TGF-β<,2>及TGF-β<

7、,3>表達比CD<,34><'+>細胞明顯降低，提示內源性TGF-β<,2>、TGF-β<,3>的表達下降也可能在CML發(fā)病的機制中起一定的作用。 3．成功構建針對不同靶位點的TGF-β<,1>的干擾表達質粒，其中針對起始編碼區(qū)的干擾質粒的抑制效率最高，對HL-60細胞TGF-β<,1>蛋白的抑制率為73.2％。 4．用RNAi技術使HL-60細胞中TGF-β<,1>基因表達下調時，TGF-β<,2>及β<,3>的表達并