成黃過程中膽汁ConABP、膽紅素、鈣含量和膽囊壁組織結(jié)構(gòu)的變化.pdf

1、由于天然牛黃產(chǎn)量極少一直供不應(yīng)求，上世紀(jì)70年代中期，國內(nèi)開始了牛體內(nèi)、外培植天然牛黃的研究并取得了成功，但培植的天然牛黃其質(zhì)和量一直不是非常穩(wěn)定，主要原因是人們對牛黃形成的機理尚不十分了解，不能完全控制牛黃的產(chǎn)量與質(zhì)量。為此，我們通過牛黃發(fā)生器內(nèi)成黃實驗、羊膽囊內(nèi)成黃實驗，利用電泳技術(shù)、層析技術(shù)等方法研究了膽汁中蛋白質(zhì)在牛黃形成過程中的作用，動態(tài)觀察了膽汁主要成分在牛黃形成過程中的變化和膽汁的成黃規(guī)律。本試驗包括以下六個部分：

2、 一、耐膽汁大腸桿菌的馴化及牛羊膽汁蛋白質(zhì)電泳分析 將大腸桿菌接種到膽汁濃度逐漸增加的膽汁-肉湯培養(yǎng)基中，經(jīng)過培養(yǎng)獲得耐膽汁的大腸桿菌，該菌能在膽汁中大量繁殖，含量達到108個/mL以上。對牛、羊膽汁和蛋白質(zhì)Markers在同一塊膠上進行電泳，用凝膠圖像分析系儀和凝膠圖像分析系統(tǒng)進行分析，得知牛、羊膽汁的蛋白質(zhì)條帶種類基本相同，但兩者相同分子量的蛋白質(zhì)濃度存在差異。 一、膽汁輻照滅菌的輻照條件及輻照前后膽汁理化性質(zhì)的變化

3、 利用Co60輻照膽汁，500mL膽汁輻照量為5KGy時滅菌率為98％，輻照量為15KGy時可完全滅菌。輻照前后膽汁蛋白質(zhì)條帶的數(shù)目未發(fā)生變化，各條帶的光密度積分占總蛋白質(zhì)光密度積分的百分比也無明顯變化。 三、牛羊膽汁提取ConABP及其電泳對比分析 通過親和層析技術(shù)從膽汁中分離提取了ConABP并對其進行電泳分析。結(jié)果表明，牛、羊膽汁中ConABP均為分子量為28.5KDa、24.4KDa、16.2KDa和13

4、.0KDa的四種分子量大小的蛋白質(zhì)；ConABP的條帶分布于膽汁蛋白質(zhì)條帶的中下區(qū)域，是分子量較小的四種蛋白質(zhì)。 四、牛黃發(fā)生器內(nèi)成黃過程中牛膽汁ConABP、總蛋白、膽紅素、Ga2+含量的變化 利用大腸桿菌(細(xì)菌組)和β-G酶(酶組)在體外牛黃發(fā)生器內(nèi)進行成黃試驗。結(jié)果表明，細(xì)菌組的成核時間為3.7±0.2h，酶組為0.75±0.2h。細(xì)菌組膽汁中牛黃核的密度隨時間延長逐漸增多，在18h內(nèi)增加較慢、18h～68h間增加

5、較快，且在68h時其密度最高，隨后逐漸下降。酶組牛黃核在12h內(nèi)生長較快，12h～18h變?yōu)榫徛卟⒂?8h時達到高峰，隨后逐漸下降至一相對穩(wěn)定值。牛黃核可視表面積隨時間延長逐漸增大，膽汁中蛋白質(zhì)濃度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，膽汁膽紅素含量在成黃過程中呈下降的趨勢，但在下降的過程中稍有起伏。膽汁中Ca2+的濃度細(xì)菌組在18h以內(nèi)呈下降的趨勢，在18～44h稍微上升；酶組的Ca2+濃度基本上保持在下降的趨勢。ConABP比例呈現(xiàn)先上升后下

6、降的趨勢，在牛黃核形成的初期主要是大分子蛋白質(zhì)參與牛黃核的形成。 五、羊膽囊內(nèi)成黃過程中羊膽汁ConABP、總蛋白、膽紅素、Ga2+含量的變化 在試驗羊膽囊內(nèi)手術(shù)植入異物(異物組)或大腸桿菌(細(xì)菌組)，觀察其成黃效果。異物組和細(xì)菌組的羊黃核密度和可視表面積均呈先增大后變小的趨勢。細(xì)菌組膽汁總蛋白濃度在12h內(nèi)呈增長趨勢，12h后逐漸下降，最后趨于平穩(wěn)，但高于原始濃度；膽紅素和Ca2+濃度呈逐漸降低的趨勢；ConABP占總

7、蛋白的比例在24h內(nèi)呈增高趨勢，但于24h后逐漸縮小。異物組總蛋白濃度一直呈緩慢增加趨勢，膽紅素和Ca2+的濃度則呈逐漸降低的趨勢；ConABP占總蛋白的比例在24h內(nèi)逐漸減小、24h～144h逐漸增大，144h后又呈逐漸減小的趨勢。 六、羊膽囊內(nèi)植入異物后囊壁組織結(jié)構(gòu)的變化 羊膽囊內(nèi)植入異物后，定期手術(shù)取出膽囊壁進行組織病理學(xué)觀察。在異物植入15天時膽囊壁粘膜上皮柱細(xì)胞間的杯狀細(xì)胞及固有膜中的黏液腺大量增生，粘膜皺璧的