食管鱗癌候選擴增癌基因研究.pdf

1、本文從基因擴增的角度出發(fā)，在實驗室前期進行的食管癌細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)研究以及文獻報道的基礎(chǔ)上，從擴增發(fā)生頻率較高的染色體區(qū)段1 q、3q、8q和11q中尋找與食管癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的擴增基因。 首先挑選30個可能與腫瘤相關(guān)的基因，通過RT-PCR方法檢測其在16對食管癌及相應(yīng)的癌旁組織的表達(dá)，結(jié)果顯示TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、EIF5A2、p63、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌組織過表達(dá)的

2、頻率大于30％。利用這9個基因內(nèi)部的UniSTS，進一步通過半定量PCR方法檢測其在另外20對食管癌及配對癌旁組織中的基因組DNA含量，發(fā)現(xiàn)TXNRD3、RAB7、AMOTL2、CCNL1、MUC4、TMEMl6A和CTTN基因在食管癌組織中擴增頻率不低于20％。熒光原位雜交也證實CCNLl和CTTN基因在食管癌組織存在擴增。 定位于11q13上的cortactin(CTTN,也稱為EMS1)基因編碼的蛋白是促進肌動蛋白核化和支

3、鏈形成的重要分子，目前對其在具體腫瘤中作用的研究還相對較少，為此我們對該基因在食管癌中的作用進行了深入的研究。食管癌組織芯片的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)CTTN在食管癌中過表達(dá)率為68.8％(86/125)，過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期相關(guān)。11lq13上另一重要癌基因CCND1在食管癌中過表達(dá)率為47.0％(55/117)，其表達(dá)雖與CTTN表達(dá)顯著相關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床參數(shù)無明顯相關(guān)性。說明CTTN基因是11q13上與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫

4、瘤分期相關(guān)的獨立因素。 在食管癌細(xì)胞系EC9706的體外實驗中，CTTN RNAi不影響細(xì)胞的增殖、平板集落形成、細(xì)胞周期進展和對Matrigel的粘附能力，但可抑制細(xì)胞的劃痕愈合、運動穿膜、Matrigel侵襲、軟瓊脂集落形成和抗失巢凋亡能力。體內(nèi)實驗顯示，CTTN表達(dá)降低可抑制裸鼠皮下瘤生長和實驗性肺轉(zhuǎn)移，延長實驗性轉(zhuǎn)移裸鼠的生存期。針對CTTN影響EC9706細(xì)胞抗失巢凋亡能力這一現(xiàn)象，我們進一步探討其分子機制。發(fā)現(xiàn)P13

5、K和MEK抑制劑均可增加EC9706細(xì)胞的失巢凋亡，但CTTN只影響Akt的活化，對Erk和EGFR激活無影響，提示CTTN的抗失巢凋亡作用與PI3K-Akt通路有關(guān)。我們在KYSE410食管癌細(xì)胞中也驗證了CTTN的高表達(dá)有助于保護細(xì)胞抵抗失巢凋亡，并可提高Akt的活化水平。進一步在EC9706和KYSE410細(xì)胞中，Co-IP實驗證實CTTN和PI3K蛋白分子可被共沉淀，提示CTTN可能通過與PI3K相互作用，活化PI3K-Akt通